| 研究課題/領域番号 |
17K09750
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
石原 智彦 新潟大学, 脳研究所, 助教 (70612232)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | ALS / TDP-43 / 選択的スプライシング |
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| 研究実績の概要 |
当初の予定通り，初年度に 1) 剖検組織でのTDP-43 mRNA の選択的スプライシング（AS）多様性の確認，定量，2) 組織中でのTDP-43 mRNA ASに関与する 因子の解析を行った．本年度は 1) AS-mRNA由来のC末端変異型TDP-43蛋白（vTDP-43）の生化学的解析と2) 罹患組織でのvTDP-43 蛋白の局在確認を行った．
野生型TDP-43 cDNAを鋳型にvTDP-43 発現プラスミドを作成し，Lipofectamine 2000 (Invitrogen)を用いて，HEK293T細胞に発現実験を行った．72時間後に細胞を回収し，RIPA，Urea buffer 可溶性分画をそれぞれ回収し，TDP-43 N-末抗体を一次抗体としてウエスタンブロットを行った，野生型TDP-43発現細胞と比較して，vTDP-43 発現細胞では有意に Urea分画で多く発現蛋白質が検出された．また免疫染色では，vTDP-43発現細胞での凝集体形成が確認された．この結果から，vTDP-43蛋白の不溶性，凝集性が確認された．
またvTDP-43 特異的抗体を作成し，筋萎縮性側索硬化症（ALS）罹患組織である腰髄組織にて免疫染色を実施した．その結果，一部の残存運動神経細胞に，vTDP-43特異的抗体で認識される封入体を確認し得た．これらの結果より，vTDP-43 蛋白質がALS病態に関与している事が示唆された．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初計画した予定に準じ，TDP-43 AS mRNA由来の変異型TDP-43蛋白質機能解析を行えている．
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の予定どおり，次年度はリキッドバイオプシー解析を行う．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予定した研究が順調に進行したため，使用予算が当初見込みより減額された．
次年度も当初計画の予定に準じ，解析を進めていく．
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