| 研究課題/領域番号 |
17K09887
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
秦野 修 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (40164850)
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| 研究分担者 |
竹田 浩之 愛媛大学, プロテオサイエンスセンター, 准教授 (40609393)
大西 健 茨城県立医療大学, 保健医療学部, 教授 (50152195)
竹森 洋 岐阜大学, 工学部, 教授 (90273672)
三宅 牧人 奈良県立医科大学, 医学部, 助教 (80601400)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | ステロイドホルモン / 質量分析イメージング / ステロイド合成酵素 / プロテオミクス / コムギ胚芽無細胞タンパク質合成 |
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| 研究実績の概要 |
ステロイドホルモンの質量分析イメージング(MS Imaging)法では、イオン化効率/検出感度の向上のため、現時点において組織切片上（on-tissue）での誘導体化が必須であるが、この手法は続くマトリックス塗布と合わせて、２段階の切片の湿潤処理が必要である。この際、これらの湿潤処理によって切片上の目的分子が拡散して、空間分解能が低下する。本年度は表面の微細ナノ構造がイオン化効果を持つSALDI法等の適用を含めて、１段階で誘導体化/マトリックス塗布効果を達成する手法の開発を行う目的で、目的分子の拡散を極力抑えて、より高空間分解能なMS Imaging の試料作製を実現することを試みた。又、ステロイドホルモンと、ステロイド合成酵素の局在との相関を解析する目的で、アミノ酸配列の類似性が極めて高く、免疫組織化学法では区別が難しい、アルドステロン合成酵素と、コルチコステロン合成酵素の染め分けを行うために、両酵素間で異なるペプチド部位を選定して、各々のペプチド部位に特異的な抗体を作成した。
又、ステロイドホルモン産生経路へのシグナル伝達タンパク質の関与を明らかにする目的で、ステロイドホルモン産生異常を含めて多彩な表現型異常に関与する塩誘導キナーゼ（SIK）に着目して、ヒトプロテインキナーゼ群、ヒト転写因子群から、SIKタンパク質に相互作用するタンパク質因子を網羅的にスクリーニングする系の構築を行っている。このため、コムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いてビオチン化ヒトSIKをcDNAより作成し、SIKに結合することが既知である４種のタンパク質との相互作用解析系（AlphaScreen法）を構築した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
質量分析イメージングでは、簡便な１ステップ試料の前処理法の開発を進めており、又、ステロイド産生異常にも関与する塩誘導キナーゼSIKに相互作用するタンパク質因子の網羅的なスクリーニングを進めているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
ステロイドホルモン合成/産生異常に関与するタンパク質を新たに探索する目的で、塩誘導キナーゼSIKに相互作用するタンパク質のスクリーニングを、ヒトcDNAより網羅的に合成されたタンパク質群から、愛媛大学で構築されたヒトプロテインキナーゼ群アレイ、ヒト転写因子群アレイを用いて、AlphaScreen法によって行う予定である。又、ステロイドの質量分析イメージングでは、より簡便、高空間分解能、高感度な試料前処理法の開発を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
年度末に合わせて無理に全額を使用し切るのでなく、次年度予算と合わせて、より有効に研究費を使用するために次年度使用額が生じた。 次年度使用額の使用計画：消耗品に使用する。
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