血小板減少症を伴う橈尺骨癒合症患者で同定されたEVI1変異体の機能解析

2019 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17K10045
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 新堀 哲也 東北大学, 医学系研究科, 准教授 (40436134)
• 研究分担者: 松原 洋一 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 所長室, 研究所長 (00209602) ; 青木 洋子 東北大学, 医学系研究科, 教授 (80332500)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• キーワード: 橈尺骨癒合

研究実績の概要

最近、SMAD6およびNOGの変異が非症候性橈尺骨癒合症患者で同定され、不完全浸透であると報告された(Yang Y et al. Genet Med)。本年度はそれを念頭に橈尺骨癒合症のみの患者の検体を収集した。頬粘膜細胞、爪、毛髪などの検体を収集した。DNAを抽出し、MECOM、HOXA11、SMAD6、NOG、遺伝子の全エクソンおよび近傍のイントロンの塩基配列決定を行った。また、患者における臨床症状情報については、頻度の高い症状のみならず、これまで見過ごされていた症状の有無にも注目して臨床情報収集を続けている。
また、モデルマウスの解析を行い、表現型解析を継続した。
ゼブラフィッシュをモデルとする解析を行うため、胚にｍRNAやmorpholinoなどを導入した。Tg(CD41:GFP)（thrombocyteが蛍光標識されるトランスジェニックゼブラフィッシュ）の胚に対してMECOMの野生型および変異型RNAを注入し、表現型の観察を継続している。また、mecomを対象としたmorpholinoを設計し、Tg(CD41:GFP)の胚に注入したところ、用量依存性に表現型の変化が観察された。より詳細な観察のための条件検討を継続している。また、CRISPR/Cas9によるmecomのフレームシフト変異を持つ個体の作成も行い、F1, F2作成を行った。ホモで変異を持つ個体について成魚まで成長できるか検討を続けている。

研究成果

• [雑誌論文] Germline-Activating RRAS2 Mutations Cause Noonan Syndrome (2019)
  • 著者名/発表者名: Niihori Tetsuya、Nagai Koki、Fujita Atsushi、Ohashi Hirofumi、Okamoto Nobuhiko、Okada Satoshi、Harada Atsuko、Kihara Hirotaka、Arbogast Thomas、Funayama Ryo、Shirota Matsuyuki、Nakayama Keiko、Abe Taiki、Inoue Shin-ichi、Tsai I-Chun、Matsumoto Naomichi、Davis Erica E.、Katsanis Nicholas、Aoki Yoko
  • 雑誌名: The American Journal of Human Genetics 巻: 104 ページ: 1233～1240
  • DOI: doi:10.1016/j.ajhg.2019.04.014
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [学会発表] RRAS2の活性化型生殖細胞変異はNoonan症候群を引き起こす (2019)
  • 著者名/発表者名: 新堀哲也, 永井康貴, 藤田京志, 大橋博文, 岡本伸彦, 岡田賢, 原田敦子, 木原裕貴, Thomas Arbogast, 舟山亮, 城田松之, 中山啓子, 阿部太記, 井上晋一, I-Chun Tsai, 松本直通, Erica E. Davis, Nicholas Katsanis, 青木洋子
  • 学会等名: 日本人類遺伝学会第64回大会