| 研究課題/領域番号 |
17K10215
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
佐々木 隆子 大分大学, 医学部, 客員研究員 (30133193)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 細胞外マトリックス / タンパク質 / リコンビナント / Hemicentin |
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| 研究実績の概要 |
Hemicentinは線虫においてはじめて同定された分子量60万の細胞外マトリックスタンパク質である。近年ゼブラフィッシュの遺伝解析から、その変異がヒトの遺伝性疾患であるFraser syndromeとその類似疾患の原因遺伝子であることが示唆された。これまでのhemicentinの機能解析は線虫ならびにゼブラフィッシュのみで、哺乳類におけるこのタンパク質の機能ならびに発現様式は不明であった。そこで、本研究ではヒトhemicentinをリコンビナントタンパク質として発現・精製し、それらの性状ならびに機能解析を遂行し、さらに、抗体を作成し、マウス組織での発現分布を調べることを目的とした。
哺乳類ではhemicentin-1と-2の2種類があるが、それらに対する抗体を各hemicentinについて数種類作製し、マウスでの発現様式を調べた。Hemicentin-1は腎臓子宮体メサンジウム、毛嚢の基底膜、眼の強膜ならびにリンパ導管内腔に発現が認められたが、hemicentin-2は検出できなかった。発現解析はWashington大学との共同研究として行い、Dev.Dyn. 2020に発表した。一方、リコンビナントタンパク質は、少ないながらも精製可能なレベルで発現したので、精製を試みたが、全長のタンパク質は分子量も大きく凝集体を形成し、解析に十分な量ならびに純度を得られるのは難しかった。しかし現在は精製法を改良し、少量ながら精製が可能になった。全長タンパク質の精製と並行して、全長のタンパク質をフラグメントに分けて発現し、それらの精製も行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
全長のリコンビナントタンパク質は、どちらも分子量60万と高分子であること、さらに精製中に凝集体を形成し、機能解析に必要な量を得るのが難しかったため、精製タンパクを使った解析が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
精製した全長タンパク質ならびにフラグメントを用い、他のマトリックスタンパク質ならびにインテグリン等のレセプターとの結合性の解析を進める。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究の遅延による。今年度はリコンビナントタンパク質の発現・精製さらにその解析のために使用する。
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