| 研究課題/領域番号 |
17K10237
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| 研究機関 | 岐阜大学 |
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研究代表者 |
加納 宏行 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 非常勤講師 (40566494)
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| 研究分担者 |
清島 眞理子 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 教授 (00171314)
中村 光浩 岐阜薬科大学, 薬学部, 教授 (30433204)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | アトピー性皮膚炎 / サイトカイン / スキンブロット |
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| 研究実績の概要 |
アトピー性皮膚炎（AD）の発症・病態維持に深く関わる皮膚角層バリア機能の低下に、角質細胞間脂質セラミドの脂肪酸側鎖の短鎖化が関与することも知られている。我々はIFN-γによる脂肪酸側鎖の短鎖化を培養ケラチノサイトとダニ抗原反復塗布による皮膚炎マウスで見いだしたが、Th1サイトカインIFN-γがAD患者の角層バリア異常に実際関与しているのか不明である。IFN-γを含めた病変部サイトカインを非侵襲的に検証する目的で、ニトロセルロースメンブレンを皮膚表面に貼付して、皮膚の蛋白質を経皮的に採取し、抗体を用いて検出する「スキンブロッティング法」の検討をした。各種基礎実験（抗体の特異性、濃度、反応時間等の条件検討）の後、IL-4、IL-13、IL-31、IL-33、IFN-γ、TSLP、TNFα等をスクリーニングした。その結果、IL-4、IFN-γのシグナルがAD患者皮疹部で捉えられた。一方、IL-13、IL-31、IL-33、TSLP、TNFαのシグナルは捉えられなかった。加えて、バリア機能の低下の指標としてアルブミンを調べ、AD皮疹部で強い陽性シグナルがえられた。しかし、その後、2次抗体（抗マウスIgG抗体など）がヒトIgGも認識することが判明。皮疹部にはグロブリンも検出されるため、検出法を再検討。まず2次抗体だけを反応させ発色、その後に抗サイトカイン抗体、2次抗体で発色し（間接法）、交叉反応を除外、最後にHRP標識抗ヒトアルブミン抗体で発色する方法（三重染色）を確立し、臨床例での検討を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
2次抗体(抗マウスIgG抗体、抗ラビットIgG抗体など)の特異性を調べたところ、ヒトIgGにも交叉反応することが判明したことで、検査方法の改良に想定外の時間を要したが、新たに確立した三重染色法を用いた臨床例での検討（主にIL-4、IFNγ、IL-33）をしたところ、”明らかな陽性”と判断できる症例が現在までのところない。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまで、ヒトIgGの混在を避けるため明らかな滲出液のある皮疹を避けていたので、軽症例での検討を主に行ってきたが、より重症例にも対象を拡大し検討を加え、この方法でのサイトカイン検出の可能性を最終的に判断する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
COVID-19により患者からの検体採取機会が減ったため。
必要な抗体の購入に充てる予定。
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