| 研究課題/領域番号 |
17K10498
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| 研究機関 | 国立研究開発法人量子科学技術研究開発機構 |
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研究代表者 |
中山 文明 国立研究開発法人量子科学技術研究開発機構, 放射線医学総合研究所 放射線障害治療研究部, グループリーダー(定常) (50277323)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 血管肉腫 / 放射線治療 |
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| 研究実績の概要 |
いわゆるAngiosarcomaには、血管由来とされる血管肉腫とリンパ管由来とされるリンパ管肉腫が含まれたもので、従来は血管肉腫とリンパ管肉腫の正確な鑑別が困難だったため、放射線療法についても両腫瘍を区別せず実施されている。そこで、平成30年度は、増澤らが樹立したヒト血管肉腫細胞株ISO-HAS、ヒトリンパ管肉腫細胞株Mo-LAS細胞を使って、各細胞株のX線に対する放射線感受性を検討した。実際に使用したのは、サブクローンにより樹立したISO-HAS-B細胞とMo-LAS-B細胞であり、FCS濃度も少なく添加物も必要なく、10%FCS DMEMで培養が可能になったものである。細胞の放射線感受性を検討する際、コロニー形成法による測定が一般的だが、血管肉腫は培養プレートでコロニーを形成しにくい性質を持つことが判明し、ISO-HAS細胞もMo-LAS細胞もコロニーの形成に失敗した。そこで、コロニー形成法に代わるアッセイとしてHigh-density survival assay を採用し、ISO-HAS細胞とMo-LAS細胞に対してその実験条件を確立し測定した。その結果、High-density survival assayにより算出したD10は共に6Gy未満であり、一般的に放射線抵抗性と言われている細胞株よりは放射線感受性であった。しかしながら、以前検討したマウス血管肉腫細胞株ISOS-1細胞と比較すると、両ヒト細胞株はより抵抗性という結果だった。一方、ISO-HAS-B細胞とMo-LAS-B細胞の間のD10には現時点で有意な差が認められず、今後とも検討を続けていく予定である。
マウス実験モデルの作成として、ISOS-1細胞をマウスの大腿に移植し、BALB/cマウス及びヌードマウスの両方で腫瘤の形成に成功した。ヒト細胞株については、細胞増殖率の低さが問題となってうまくいっていないが、SCIDマウスへの移植を前提に今後とも条件検討を重ねていく。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
うまくいかない場合も想定の範囲内であったため、ほぼ計画通りに実施できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
血管由来とされる血管肉腫とリンパ管由来とされるリンパ管肉腫をそれぞれ代表するものとして、ヒト血管肉腫細胞株ISO-HAS、ヒトリンパ管肉腫細胞株Mo-LAS細胞を使って、Ｘ線照射後の転移能を測定する。方法は初年度確立したマトリジェルを使ったinvasion assayとIncuCyteを用いたスリット法によるmigration assayで行う。各血管肉腫細胞株でＸ線照射による変化を検討し、転移能が増加もしくは減少する線量域を同定する。
両ヒト血管肉腫細胞株のマウス大腿への腫瘤形成は困難に直面しているため、新たなマウス実験モデル条件を確立しヒト血管肉腫細胞の転移能を検討する。すなわち、マウス脾臓への各血管肉腫細胞を注射し、その細胞の肝臓への移動を計測することでin vivoの転移能を評価するアッセイを作成する。このアッセイを用いて、血管由来とされる血管肉腫とリンパ管由来とされるリンパ管肉腫の放射線治療後の転移能を検討する。
ヒト血管肉腫細胞株ISO-HAS細胞・ヒトリンパ管肉腫細胞株Mo-LAS細胞を使って、X線による細胞内の変化をDNAマイクロアレイで解析する。関連候補分子は、Western blottingにても検証し、阻害剤等を使った阻害実験も追加して、その関連性を探索する。
これまでの結果をまとめて、血管由来とされる血管肉腫とリンパ管由来とされるリンパ管肉腫との放射線治療に対する反応性の相違を総合的に評価する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予定していた高額な抗体・組織免疫試薬・マトリゲル・SCIDマウスの購入を、次年度に繰り越したため、次年度使用額が生じた。
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