| 研究課題/領域番号 |
17K10535
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
林 秀樹 千葉大学, フロンティア医工学センター, 教授 (20312960)
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| 研究分担者 |
吉田 憲司 千葉大学, フロンティア医工学センター, 助教 (10572985)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | リポソーム化製剤 / リンパ節転移モデル / 近赤外蛍光バブル |
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| 研究実績の概要 |
本年度は，(1)BCG-CWSの近赤外蛍光色素配合リポソーム（LP-ICG-C18）への内包化と製剤の形成評価，(2)製剤の生体内動態とリンパ節内腫瘍免疫誘導に関する検討を行うための転移モデルマウスの作成，(3)近赤外蛍光色素配合マイクロ・ナノバブルの特性解析の3つを行った。
(1)については先行文献情報に基づいたリソニケーションによるBCG-CWSの粒子化を試み，その収率の検討を行った。昨年度より行っている動的光散乱法による粒子径解析及び透過型電子顕微鏡(TEM)による解析に加え，CryoTEMを用いた形態観察を用いて,より生体内での環境に近い状態で観察を行ったところ，粒径が300～700 nmのBCG-CWS内包近赤外蛍光色素配合リポソーム(BL-ICG-C18)の形成が確認された. しかしながら得られた相対的内包頻度は数％程度であった。
(2)については，C3H/Heマウスに同系の腫瘍細胞であるSCCVIIを移植することで下流のリンパ節に転移を引き起こす腫瘍転移モデルの再現性を確認したところ，転移出現頻度が極めて低い(10％以下)であることが明らかとなった。転移リンパ節中の腫瘍細胞のリクローニングを試みたが転移出現頻度の向上が得られなかった。(3)昨年度の検討で開発に成功した近赤外蛍光色素配合バブルに関しては，平均粒径数百nmのナノバブルと平均粒径数μmのマイクロバブルのin vitro，in vivo(家畜ブタ)の特性を比較した。in vitroの解析ではいずれのバブルも超音波造影能，近赤外蛍光造影能を確認でき，マイクロバブルの方が高性能であることが確認された。しかしながら，in vivoの検討ではマイクロバブルにおいて超音波造影能の確認ができなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
(1)に関してはLP-ICG-C18の内包化効率の向上に，先行文献などには記載されていない想像以上の困難性があることがわかった。リポソーム作製法の根本的な見直しも視野に入れるべきと考えられた。(2)に関しては，保有している細胞株の継代による変異にも原因があるものと考えられたが，凍結保管している数代前の同細胞株を用いても同様の結果であった。高転移株の入手，あるいは独自の手法による高転移株の確立が急務であると考えられる。(3)に関しては，リンパ節の近赤外蛍光と超音波のデュアルイメージングには，マイクロサイズのバブルが適していることが明らとなったが，マイクロバブルの耐久性(寿命)に課題が残されていることが明らかとなった。尚，本件に関しては国内外の特許出願に至る成果が達成できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
BCG-CWSの近赤外蛍光色素配合リポソーム（LP-ICG-C18）内包化製剤の収率向上のため，油中水滴遠心沈降によるベシクル形成法の検討を行う。また，BCG-CWSの免疫活性化部位のみ取り出したリポソーム化を試みる。また，マウスのリンパ節転移モデルの作製に関してはSCCVIIに転移促進因子であるTGFβ1遺伝子を導入した細胞株を樹立し，再度モデルの作製を試みる。また，脂質二重膜の成分の変更や用いる気体の種類を変更し，蛍光化マイクロバブルの長寿命化の検討を行う。
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