| 研究課題/領域番号 |
17K10709
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| 研究機関 | 名古屋市立大学 |
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研究代表者 |
佐藤 崇文 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 研究員 (10747257)
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| 研究分担者 |
齊藤 健太 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助教 (10770240)
松尾 洋一 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (40381800)
今藤 裕之 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 臨床研究医 (80790641)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 膵癌 / Girdin / 血管新生因子 / VEGF-A / IL-8 / 移動能 |
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| 研究実績の概要 |
2017年度，膵癌細胞株におけるmRNAレベルでのGirdinの発現をreal time PCRで確認し，siRNA法によるGirdinのノックダウンをおこなった．これを踏まえて，2018年度は以下の検証を行った，
①Girdinをノックダウンした細胞株における血管新生因子の発現をreal time PCRで検証したところ，一部の細胞株では，si-Girdinにおける血管新生因子VEGF-AおよびIL-8の発現低下を認めた．タンパクレベルでの発現変化の検証にELISAを用いたが，si-Girdinにおけるタンパクレベルでの産生低下については，有意かつ安定した結果が得られなかった．これには，細胞上清の回収時期や処理の方法などの要因が考えられ，再考が必要と考えている．
②発現形としての血管新生の検証に，当初はDouble chamber共培養によるAngiogenesis assayを予定したが，期間を要する実験系であることから，On Matrigel tube formation assayで，短期間的に血管新生の変化を検証することした．しかし，HUVECの培養が不安定であることや，前述の細胞上清の回収時期などの影響のため，有意な管腔形成の変化が検証できていない．
③si-Girdinにおける移動能の検証にWound Healing assayを行ったが，si-Girdinで有意にWound Healingが低下する結果には至っていない．Wound Healing assayにおける「傷つけ」方法や，細胞株の刺激因子の関与，観察部位の差異（ウェルの中央や端で異なる）などの再考の余地がある．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
タンパクレベルでの血管新生因子の産生変化が安定せず，細胞上清の回収時期や処理の方法などの要因が考えられ，再考の余地があると考えている．
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| 今後の研究の推進方策 |
・血管新生アッセイ：Girdinのノックダウン株を用いて，HUVECおよびFibroblast cellとの共培養を行い，実際の血管新生に対する抑制効果を検証する．
・Wound Healing assay以外に移動能を評価するものとして，Boyden double chamber法を用いたMigration assayも行う．また，浸潤能に与える影響の評価目的にInvasion assayも行う．
・膵癌臨床検体を用いてGirdinの発現を評価し，発現強度や分布でスケーリングを行い，臨床背景因子との比較検討を行う．
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