| 研究課題/領域番号 |
17K10773
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| 研究機関 | 金沢大学 |
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研究代表者 |
笠島 里美 金沢大学, 保健学系, 准教授 (20444200)
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| 研究分担者 |
尾崎 聡 金沢大学, 保健学系, 助教 (40401921)
川島 篤弘 独立行政法人国立病院機構(金沢医療センター臨床研究部), 臨床検査科・病理診断科, 臨床検査科部長 (20242563)
笠島 史成 独立行政法人国立病院機構(金沢医療センター臨床研究部), 心臓血管外科, 心臓血管外科医長 (90303304)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | IgG4関連疾患 / サイトカイン / MMP |
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| 研究実績の概要 |
血管病変におけるIgG4関連疾患 (IgG4-related vascular disease; IgG4-RVD)においては，解離や瘤破裂等の急性な致死的合併症がある点において，緩徐な経過の他臓器IgG4関連疾患とは予後が大きく異なるため，その進展，予後因子の解明が急務である．我々は，IgG4-RVDでは，炎症性マーカーの中心的役割を果たすIL-6高値であることを解明し，予後因子としてIL-6をはじめとしたCytokine(CKs)や，血管壁を直接破壊するMatrix metalloproteinases (MMPs)に注目し，保存血清や切除材料の組織像から，CKs, MMPsを検討し，経過や予後との関連を検討する事を本研究の目的としている．
平成29年度は保存血清を用い，CKsとしてTh2優位を示すIL-4，IL-5，IL-13，Th17優位を示すIL-17，IL-22，制御性T細胞の亢進を示すIL-10，TGF-β, 線維化の目安となるIFN-γ,炎症の中心となるIL-6のELISA測定，炎症マーカーとしてWBC, ESR;CRPの測定を進めた．血管病変を有しない他臓器IgG4関連疾患と比較すると，IgG4-RVDでは，IL-6，CRPなどの炎症性マーカーが有意に高値である事が判明し，IgG4-RVDの病因や進行と炎症所見の関連性についての見解が得られたため，論文投稿中である．また，組織でのMMPs発現の免疫組織学的検討も進行している．当初の予定のMMPs MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-9，TIMP-1，TIMP-2に加えて，MMP8，MMP13，MMP14，MT-MMPも検討している．組織球（CD68, CD163）がMMPs発現の候補と考えられ，樹状細胞マーカー（CD1a, CD11b，CD33，CD123）も追加検討している．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
1．IgG4－RVD,その比較対照群における血清CKs;MMPsの測定：保存血清を用い，CKsとしてTh2優位を示すIL-4，IL-5，IL-13，Th17優位を示すIL-17，IL-22，制御性T細胞の亢進を示すIL-10，TGF-β, 線維化の目安となるIFN-γ,炎症の中心となるIL-6のELISA測定，炎症マーカーとしてWBC, ESR;CRPの測定は進行中である．他臓器の血管病変を有しないIgG4-RDと，IgG4-RVDでは，IL-6，CRPなどの炎症マーカー値が異なっており，IgG4-RVDの病因や進行と炎症所見の関連性についての見解が得られたため，論文作成し，投稿中である．MMPsは，ELISA測定系を確立中である．また，CKs，炎症性マーカーについては，蓄積症例の経過に沿ったデータを測定中である．
2．IgG4－RVD,その比較対照群における組織のMMPs発現細胞,その部位の同定
(1)切除材料を用いた局所のIgG4-RVDの活動性の評価： IgG4-RVDの動脈壁肥厚，炎症細胞浸潤の種類，程度を計測し，IgG4-RVDの活動性を，炎症細胞浸潤の強い時期と線維化の強い時期の2期に分けて，再評価中である．
(2)MMPsの免疫組織化学染色： MMPs局在を解明するために, IgG4-RVD及び比較対照群のパラフィンブロックからの薄切標本を用いて,MMPsの免疫染色を施行中である．当初の予定のMMPs MMP-1，MMP-2，MMP-3，MMP-9，TIMP-1，TIMP-2に加えて，MMP8，MMP13，MMP14，MT-MMPも検討している．組織球（CD68, CD163）がMMPs発現の候補と考えられたが，更に，樹状細胞マーカー（CD1a, CD11b，CD33，CD123）を追加検討している．
以上の理由により，（2）おおむね順調に進展していると判断した．
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| 今後の研究の推進方策 |
1．血清MMPsの測定：ELISA法を用いて保存血清のMMPsを測定する．
2．CKs、MMPsの発現細胞の同定：IgG4-RVD血管壁におけるCKs, MMPs発現細胞同定のために，組織球(CD68, CD163)および線維芽細胞(CD34)，樹状細胞（CD1a, CD11b，CD33，CD123）の血管壁における分布の検討とこれらのマーカーとCKs，MMPsの二重免疫染色を進める．MMPs mRNA，CKs mRNAの発現細胞をRNA scope によるISHで確認する．組織標本上でmRNA発現細胞の発現部位を確認し，画像解析により定量的解析を行う．CKs，MMPsは細胞間で作用するため，免疫染色では細胞間に分泌されたCKs，MMPsも染色され，発現細胞の同定が困難な場合があるため，ISHを行って確認する． CKs，MMPs,の免疫染色による蛋白発現と，ISHによる mRNA発現細胞とを比較し，一致性や発現量を解析する． MMPs mRNAとCKs mRNAの共発現をDual ISHで確認し，CKs，MMPs発現細胞の同一性，分布，位置関係を解析し，更にDual ISHと免疫二重染色の結果を比較する．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
免疫染色での評価がやや遅れているために．RNAscopeのprobeや ELISAでの使用抗体，消耗品の購入が遅れている．次年度の使用計画は，これらの抗体や消耗品の購入に加え，研究成果発表のための旅費，英文校正費として使用する予定である．
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