| 研究課題/領域番号 |
17K10796
|
|---|
| 研究機関 | 鹿児島大学 |
|---|
研究代表者 |
佐藤 雅美 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 教授 (30250830)
|
|---|
| 研究分担者 |
横枕 直哉 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, その他 (00418857)
狩集 弘太 鹿児島大学, 医歯学域附属病院, 助教 (20648050)
大塚 綱志 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (40464466)
青木 雅也 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 助教 (50624996)
中村 好宏 鹿児島大学, 医歯学域附属病院, 講師 (60381159)
永田 俊行 鹿児島大学, 附属病院, 医員 (70611763)
武田 亜矢 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任助教 (80794700)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| キーワード | 外科 / 臨床 / 免疫学 |
|---|
| 研究実績の概要 |
複数の癌領域において、免疫チェックポイント療法などの抗体薬による治療が奏効することが知られている。しかしながら奏効例と非奏効例において、その効果を分ける生物学的相違の背景は未だ不明であり、極めて高額な抗体薬を治療効果の予測がつかない状況で投与しているのが現状である。免疫系は極めて多様で、その多様性を担保するために選択的スプライシングによって生成されるスプライスバリアントが複数存在する。抗体薬治療においては抗体が作用する部位の配列異常やスプライス異常が存在すれば抗体薬の効果は期待できず、治療効果を左右している可能性がある。本研究では、肺癌抗体治療のターゲット分子におけるスプライス異常と治療効果との分子生物学的相関について検討している。まずは肺癌の実臨床で使用開始となった抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体の治療効果とPD-1、PDL-1におけるスプライスバリアントとの関連を検討中であり、下記研究計画で進めている。
①全エクソンアレイによるスプライスバリアントおよびスプライス異常が疑われる
遺伝子を同定する。②注目分子のスプライスバリアントを判別するためのプライマーセットを設計し、PCRによるスプライスパターンを推定する。③cDNAシークエンスでのスプライスパターンや、さらにgenomicDNAシークエンスによるスプライス異常（point mutation/insertion/deletion等）を確定する。④スプライス異常により新たに生産される蛋白についてもその機能を推定する。
本年度は①で注目した遺伝子に対して、②・③を進めるために肺癌細胞株20種と肺癌臨床検体40検体からRNA、cDNAライブラリーを作製した。また肺癌に対して抗体療法を行った症例の検体も集積し、ライブラリーに加えている。現在、PD-1、PD-L1に①で注目し、②を終え、③の準備を行っているところである。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
現在までに、複数の肺癌細胞株での全エクソンアレイ解析で、PD-1、PD-L1の複数のスプライスバリアントの存在を確認した。それぞれのスプライスバリアントを判別するためのプライマーセットを設計し、PCRによるスプライスパターンの推定を可能とした。肺癌細胞株20種と肺癌臨床検体40検体を用いて作製したライブラリーで、PD-1、PD-L1のスプライスパターンをPCRで解析し、抗体療法の効果と相関している可能性が示唆されるバリアントをすでに絞り込んだ。
しかし、予想外にバリアントが多く、プライマーの作製に時間を要した。また、研究代表者本人の外科治療に伴い、研究全体の進行に遅れが生じた。
現在は、プライマーセットの設計は完了し、肺癌に対して抗体療法を行った症例の検体も集積中であり、治療効果との関連を同時に解析し、③の準備を整えている状況である。また、PD-1、PD-L1だけでなく、PD-L2、VEGF、CTLA-4など検討分子をひろげてプライマーセットを設計し、PCRによるスプライスパターンの推定を行っているところである。
|
| 今後の研究の推進方策 |
最初に注目した分子であるPD1、PD-L1のcDNAシークエンスでのスプライスパターンや、さらにgenomic DNAシークエンスによるスプライス異常（point mutation/insertion/deletion等）をまず確定し、治療効果との関連を解析する。同時に、PD-L2、VEGF、CTLA-4などひろげた検討分子に関して、②を完了し、③に備える。最初に注目した分子の③の工程が終了すれば、そのノウハウを元に他の分子に関してはスムースに②・③が行え、解析・検討が進められると考えている。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
研究者が手術などでの治療を要したため、予定の実験の一部を次年度に繰り越した。
幸いにも体調が軽快したため、次年度にこれらの検討を行う。
|
