| 研究課題/領域番号 |
17K10945
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
檜山 明彦 東海大学, 医学部, 講師 (00514382)
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| 研究分担者 |
酒井 大輔 東海大学, 医学部, 准教授 (10408007)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | Wntシグナル / ＣＣＮ family / 椎間板変性 / 腰痛の解明 / 分子学的研究 / Cell signaling |
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| 研究実績の概要 |
前年度に引き続き，椎間板変性に至る分子メカニズムの解明について研究をおこなった．
ＣＴＧＦ（ＣＣＮ２）は，Ｃｙｒ６１（ＣＣＮ１），ＮＯＶ（ＣＣＮ３），ＷＩＳＰ１（ＣＣＮ４），ＷＩＳＰ２（ＣＣＮ５）およびＷＩＳＰ３（ＣＣＮ６）を含む分泌型タンパク質のＣＣＮファミリーメンバーのうちの一つである．このうちＣＣＮ１は，ＣＣＮ２と類似の活性および発現パターンを有する一方で，ＣＣＮ３はＣＣＮ２に対して拮抗的な作用をする．またＣＣＮ２（ＣＴＧＦ）は髄核細胞中の細胞外マトリックス産生を増加させることや腰痛患者のヒト変性椎間板中におけるＣＣＮ２発現の上昇が報告されている． そこで本年度は，ＷｎｔシグナルとＣＣＮ２とのシグナル解析をおこなった．ラット椎間板細胞を，１１週齢のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの腰椎椎間板から単離培養した（ｎ＝３２）．培養した髄核細胞をもちいて遺伝子導入後にＤｕａｌ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ （Ｐｒｏｍｅｇａ）により転写活性を測定した．まずＷｎｔの活性化剤ＢＩＯ（６－ｂｒｏｍｏｉｎｄｉｒｕｂｉｎ－３′－ｏｘｉｍｅ）を添加後（各濃度０．１－１．０μＭ）のＣＣＮ２の転写活性を測定した．次にＷＴ－β－ｃａｔｅｎｉｎまたはβ－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉＲＮＡを遺伝子導入し転写活性を測定した．ＷｎｔシグナルによるＣＣＮ２の転写活性をｇａｉｎ－ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎやｌｏｓｓ－ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎから解析した結果，Ｗｎｔの活性化はＣＣＮ２転写活性を有意に減少させた．逆にＷｎｔの抑制はＣＣＮ２転写活性を上昇させた．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は大型動物椎間板変性モデルを用いたＷｎｔシグナルと抗Ｗｎｔ抗体（抗Ｓｃｌｅｒｏｓｔｉｎ抗体）や抗ＮＧＦ抗体における椎間板変性抑制効果を明らかにすることを目的としていたが、予算の関係から、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＷｎｔシグナル解析にとどまったから
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| 今後の研究の推進方策 |
椎間板変性に関わるシグナル解析をすすめることで，腰痛治療に関与する分子標的薬の開発につなげたいと考えている
課題としては臨床研究に至るまでのｉｎ ｖｉｖｏでの動物実験が必要であるが，研究費が多くかかるため現状の獲得研究費だけでは大型動物を用いた研究が難しいと考えている．
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