| 研究課題/領域番号 |
17K11143
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| 研究機関 | 高知大学 |
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研究代表者 |
蘆田 真吾 高知大学, 教育研究部医療学系臨床医学部門, 講師 (80380327)
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| 研究分担者 |
中川 英刀 国立研究開発法人理化学研究所, 生命医科学研究センター, チームリーダー (50361621)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 前立腺癌 / 病原体 |
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| 研究実績の概要 |
我々は、これまでに、前立腺癌患者20例の組織サンプルを用いてRNA-seq解析を行い、pathogen候補として4つの細菌を同定した。細菌Aは20例中15例に、細菌Bは20例中11例に、細菌Cは20例中5例に、そして細菌Dは20例中3例の前立腺癌組織中に検出された。同定されたpathogen候補のうち、細菌Aは、これまでにも前立腺癌組織への感染の報告があるが、今回の検討の結果で確証が得られたと考えられた。細菌B、C、Dについては、これまでに全く報告がなく、新たな前立腺癌のpathogenとして期待が持てると考えられた。
最初に、バリデーションとして、前立腺癌組織への感染の有無を同一症例の別サンプルを用いて検証した。細菌Aに関しては、モノクロナール抗体を用いて免疫組織染色を行ったところ、20例中19例の前立腺癌組織において細菌Aを検出できた。
次に、前立腺摘出サンプルよりDNAを抽出した。そして、細菌B、C、Dに特異的なプライマーを作製し、PCR を行い感染の有無を調べたところ、それぞれ20/20、14/20、13/20例に細菌を検出した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
RNA-seq解析によってpathogen候補を同定し、それぞれについて免疫組織染色あるいはPCRによってバリデーションを行った。そして、細菌Aを有力候補として、さらなる解析を行っている。まず、発癌機序の解明を行うため、前立腺正常上皮細胞に細菌Aを感染させ、24時間、48時間、2週間後にRNAを抽出し、マイクロアレイ解析を行った。
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| 今後の研究の推進方策 |
マイクロアレイ解析の結果、細菌Aを感染させた細胞において、ある遺伝子群の発現低下を認めた。そこで、これら遺伝子群の発現低下の機序について研究を進める。まず、epigeneticな要因について調べる予定である。
一方、細菌Aの前立腺への感染の有無について、頻度は少ないことが予想されるが、症例を増やし、感染陰性群を集めて、陽性群との相違について検討を行う。臨床的特徴（年齢、PSA 値、グリソンスコア、ステージなど）とpathogen 感染の有無との間に相関があるかどうかについて統計学的手法を用いて調べる。有意な相関が見られた場合、pathogen 感染がその因子に寄与することが分かり、後の機能解析に役立つと考えられる。また、マイクロアレイで同定した遺伝子群の発現低下と細菌Aの感染の有無に相関があるかどうかについても調べることができる。
さらに、動物実験において、細菌Aを尿道から注入し、細菌A感染動物モデルの樹立を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
前立腺におけるpathogen感染の有無をPCRによって検証するための条件設定にかなり時間を要した。従って、当初の計画より遅れている。現在、発癌メカニズム解明のため、分子生物学的手法を用いて実験を行っている。さらに、pathogen感染動物モデルの樹立も進行中である。
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