| 研究課題/領域番号 |
17K11146
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
立神 勝則 九州大学, 医学研究院, 准教授 (90380617)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 樹状細胞 / マクロファージ / 免疫チェックポイント分子 / HVEM |
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| 研究実績の概要 |
これまで我々が行ってきた臨床研究によるDC療法の安全性を基に、DCと各種薬剤との併用療法による臨床試験を検討しているが、そのためにはより有効なDCによる免疫誘導のためのメカニズムの解析が必要となる。このため、DC上の免疫チェックポイント分子であるHVEMに焦点をあて、その機能解析のためにマウスモデルによる実験を行った。
・IFN-γ ELISPOT assayによるBMDCによる抗原特異的CTLの誘導と抗HVEM抗体による抗原特異的反応の抑制の確：BMDCをHVEMブロッキングでは、抗原特異的反応は軽度の差を認めるのみであった。
・mrGM-CSFによるBMDCの誘導とHVEMの発現：IL-4添加した方がよりDC-likeなfractionが多いMHCIIhighCD11bintが増加していた。FACSによる解析では、これらのDC群で有意なHVEM発現は認められなかった。
・mrFLT3Lを使用したBMDCの誘導とHVEMの発現：CD103+の細胞群が誘導可能であった。これらの細胞群はすべてCD11bhighであり、生体内DCとは異なる細胞と考えられた。これらの細胞群でもGM-CSF±IL-4によって誘導されたDC群と同様に有意なHVEMの発現は認められなかった。
・マウスBM細胞をGM-CSFで刺激誘導した細胞群の解析：RNAseqやFACSによる解析では、マウスBM細胞をGM-CSFで刺激誘導すると、主に2つのfractionに分化することがわかった。これらの細胞群の2/3前後はMacrophage様細胞 (BM-Mac)、1/3ほどがDC様細胞(BM-DC)の可能性があり、DataBaseからは、BM-MacはHVEMを軽度発現し、BM-DCはHVEM発現している可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
DCやmacrophageなどのAPCの細胞群には様々なphenotypeが存在し、マウスやヒトなど種によって異なる。今回の実験では、これまでAPCとして広く使用されていたマウス骨髄細由来のBMDCにはHVEMの発現を異にするDC様細胞やmacrophage様細胞などのphenotypeが存在することが解明された。
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| 今後の研究の推進方策 |
ヒトPBMC由来DCのsingle cell RNAseq（GSE94820）では、ヒト末梢血中のDCでHVEMの発現は確認されている。HVEMの発現と正の相関を認める遺伝子としてCD84、XCL2、MICA（相関係数0.6）、CD103（相関係数0.4）など免疫系のmarkerもあるため、translational researchの観点から考えヒト由来のDCにおけるHVEMの意義についての機能解析を行う必要がある。
また、マウスの系による実験ではGM-CSFによって刺激して得られたHVEM陽性細胞群がmacrophage様細胞の可能性があり、macrophageにおけるHVEM発現の意義についても興味深い。抗腫瘍免疫に抑制的に作用するTumor-Associate Macrophage(TAM)に関しては、マウスモデルにおいてHVEMはマウスTAMに発現していることがわかっている（GSE101995）。TAMにおけるHVEMによる免疫抑制系のメカニズムに関しても解析予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験に必要な消耗品を購入予定である
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