| 研究課題/領域番号 |
17K11191
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| 研究機関 | 帝京大学 |
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研究代表者 |
金子 希代子 帝京大学, 薬学部, 教授 (90147075)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 尿路結石 / COM結晶の生成 / protein Z |
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| 研究実績の概要 |
平成30年度は、平成29年度に購入した顕微鏡システムを使って、シュウ酸カルシウム一水和物（COM）の結晶化過程を、ヒト腎臓の尿細管に由来するHK-2細胞を用いて確認した。HK-2細胞をコンフルエントになるように培養した後、その細胞の上でCOM結晶化を行い、結晶の大きさと数を確認した。私達が尿路結石中から発見している血液凝固に関わるGlaタンパク質であるProtein Zと、既に発見されているOsteopontin、Prothrombin の３つのタンパク質は、COM結石から特異的にまた同じバンドから検出されるため、それらを培養したHK-2細胞上に添加した時のCOM結晶の変化も観察した。この結果は、日本薬学会関東支部会（平成30年9月）でポスター発表した。
また、尿路結石の分析に関しては、特殊な結石であるマトリックス結石（腎軟結石）と巨大な膀胱結石について、分析を進めた。はじめに微小領域Ｘ線回折装置と赤外分光分析装置を用いて、結石の無機成分を分析した。この結果は、日本薬学会第139年会（平成31年3月）でポスター発表した。また、COM結石と同様に、これらの結石をKCl,ギ酸,グアニジン塩酸,EDTAと４段階で抽出し、SDS電気泳動でタンパク質を分離した。結石に含まれるマトリックスタンパク質のプロテオーム解析については、令和元年度に実施予定である。さらに、平成29年度に実施した混合結石の結果が論文として掲載された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
予定していたヒト尿細管細胞（HK-2細胞）を用いたCOM結晶の生成については、予定通り、研究を遂行することができ、COM結晶化過程を確認することが可能であった。また尿路結石の分析に関しても、今までとは異なる成分の結石の分析を開始した。
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| 今後の研究の推進方策 |
尿路結石（COM結石）から同時に検出されるProtein Z、Osteopontin、Prothrombin について、タンパク質の相互作用を検討する実験に着手する。３種のタンパク質の比率、インキュベートの有無、カルシウムの有無、ジチオスレイトールによる還元の有無など、条件を変えてNative電気泳動を行い、比較する。また円偏光二色性スペクトルを行い、立体構造の変化を調べたいと考えている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
倹約して使用したために、次年度使用額が出ています。しかし、研究の継続期間を１年延期したいと考えており、これから２年間の研究費（主に消耗品、論文校閲代など）として使用したいと考えています。
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