| 研究課題/領域番号 |
17K11394
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| 研究機関 | 福島県立医科大学 |
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研究代表者 |
室野 重之 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (20345622)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | ヒトパピローマウイルス / 中咽頭癌 / 転移 / 上皮間葉転換 |
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| 研究実績の概要 |
ヒトパピローマウイルス(HPV)E5蛋白が上皮間葉転換を誘導し転移能を亢進するとの仮説の検証を試みた。
2020度は、PART I:「HPV E5発現ベクター作成と形質導入による上皮間葉転換の検証」を継続した。Epstein-Barrウイルスの癌蛋白であるLMP1により上皮間葉転換が誘導される気道上皮を見出しており、同細胞にHPV E5を形質導入する予定としてHPV E5蛋白発現プラスミド作成した。しかし形質導入が適切にできず、上皮間葉転換の検証はできていない。研究期間を1年延長し、他の細胞を使用することも含め、検証を進めていく。
また、PART III:「HPV関連および非関連中咽頭癌組織における転移関連因子の発現および上皮間葉転換」についても並行して実施することとした。本研究年度も、前年度に引き続き、中咽頭癌におけるp16免疫染色とGP5+/GP6+プライマーを用いたPCRによるHPV DNAの検出を行い、HPV関連の有無を確認した。転移関連因子として、前年度に続きG-CSFに注目し免疫染色を行ったが、白血球数をはじめとする臨床背景因子との相関はなく、またHPVとの関連も確認されなかった。
一方、PART II:「HPV E5形質導入による転移関連因子の発現変化とその機能の検証と関与するシグナル伝達路の解明」については、HPV E5蛋白発現プラスミドを作成したが、形質導入が適切にできず、検証できなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2020年度に予定していたPART I:「HPV E5発現ベクター作成と形質導入による上皮間葉転換の検証」において、モデルとなる上皮細胞を見出し、Epstein-Barr ウイルスの癌タンパク質であるLMP1(latent membrane protein 1)により形質転換され上皮間葉転換の傾向を示すことを確認している。同細胞に形質導入するE5蛋白発現プラスミドを作成下が、形質導入が適切に行えず、こちらの検証は行えていない。
2020年度に予定していたPART III:「HPV関連および非関連中咽頭癌組織における転移関連因子の発現および上皮間葉転換」については並行して実施した。本研究年度も、引き続き中咽頭癌におけるp16免疫染色とPCRによるHPV DNAの検出を行い、HPV関連の有無を確認した。一方、転移関連因子としてG-CSFに注目して引き続き免疫染色をしたが、臨床背景因子やHPVとの関連は見いだせなかった。
上記により、やや遅れていると判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
HPV E5蛋白発現プラスミドを作成したが、形質導入が適切に実施できなかった。陽性対照的に使用しているEBV LMP1発現プラスミドの形質導入も試みて、HPV E5蛋白発現プラスミドの形質導入を効果的に行えるようにする。
これにより、PART I:「HPV E5発現ベクター作成と形質導入による上皮間葉転換の検証」を加速的に実施するとともに、 PART II:「HPV E5形質導入による転移関連因子の発現変化とその機能の検証と関与するシグナル伝達路の解明」に注力する。さらに、 PART III:「HPV関連および非関連中咽頭癌組織における転移関連因子の発現および上皮間葉転換」においても、G-CSF以外に、転移関連因子や上皮間葉転換に関わる因子の免疫染色を実施していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナウイルス感染症の広がりもあり、研究の進展が順調ではなく、今年度使用額が予定よりも少ない額となった。研究機関を延長して次年度使用額とした。
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