| 研究課題/領域番号 |
17K11403
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
金澤 丈治 自治医科大学, 医学部, 客員研究員 (20336374)
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| 研究分担者 |
今吉 正一郎 自治医科大学, 医学部, 助教 (00570186)
水上 浩明 自治医科大学, 医学部, 教授 (20311938)
草鹿 元 自治医科大学, 医学部, 教授 (00265258)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 頭頸部癌 / メチル化 / 癌抑制遺伝子 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は, Ten-eleven translocation methylcytosine dioxygenase 2 (TET2)を治療遺伝子とする頭頸部癌への新規遺伝子治療の基礎研究である．頭頸部癌は多数の遺伝子変異を伴っており治療のためには複数の癌シグナルを同時に抑制する必要がある．TET2は脱メチル化酵素でありメチル化で不活化した癌抑制遺伝子を同時に複数活性化できるため頭頸部癌には適した治療遺伝子と考えている．
①頭頸部癌細胞別のTET2遺伝子発現の確認と5hmCの定量とその相関の解明：
申請者らは，TET2の発現と細胞内の5hmCの量が相関するかを知るために,TET2の発現をウエスタン解析で検討するとともに,ゲノムDNA中に含まれる5hmC量を用いて定量化している．頭頸部癌においてもTET2の発現が低い細胞は5hmC量が少ない傾向にある．
②TET2の頭頸部細胞株への遺伝子導入と細胞動態・情報伝達経路の確認：
TET2とGFPの融合蛋白が発現するようにサイトメガロウイルスプロモーター(CMV)の下流にTET2-GFPの順で各遺伝子を配列したpCMV-TET2-GFPの作成した．現在は，このプラスミド頭頸部癌細胞株にpCMV-TET2-GFPを遺伝子導入しTET2安定発現細胞を樹立している．TET2の発現はウエスタン解析で確認し今後の実験で使用する予定である．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初使用した一次抗体のウエスタンブロッドでのTET2の発現が不安定なため一次抗体の最適化の実験を追加している．このためTET2安定発現株の樹立に時間を要している．
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| 今後の研究の推進方策 |
①TET2による癌抑制遺伝子の再活性化と作用機序の確認:
樹立できたTET2安定細胞株を用いて癌抑制遺伝子の再活性化を確認する．具体的には，樹立したTET2安定発現細胞の形態，増殖能，浸潤能およびアポトーシス誘導の有無などの表現型の変化を観察する． 更に，TET2の情報伝達経路を確認する．
②ウイルスベクターの構築と遺伝子導入:
これまで得られた頭頸部癌での癌抑制遺伝子の脱メチル化による治療効果に関する知識を背景に，遺伝子治療の基礎実験を行う．遺伝子治療のためにはウイルスベクターの作成が必要である．今回の実験には，申請者が最もよく使用しているアデノ随伴ウイルスベクターを使用する予定である．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験の遂行が遅れているため、費用の支出も遅れている. 引き続き遅れていた実験についても、実験を開始する予定である。それに伴い費用の支出も予定通り必要となる.
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