| 研究課題/領域番号 |
17K11627
|
|---|
| 研究機関 | 昭和大学 |
|---|
研究代表者 |
森崎 弘史 昭和大学, 歯学部, 講師 (30317581)
|
|---|
| 研究分担者 |
深町 はるか 昭和大学, 歯学部, 助教 (10433799)
桑田 啓貴 昭和大学, 歯学部, 教授 (60380523)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
|
| キーワード | Streptococcus sanguinis / csRNA |
|---|
| 研究実績の概要 |
前年度から引き続き、感染性心内膜炎の起因菌の１つである、Streptococcus sanguinisを対象とし、低分子RNAの解析を行った。まず、細菌の情報伝達機構である二成分制御系のCiaRHシステム制御を受ける一連の低分子RNA（cia-dependent small RNA: csRNA）のうちcsRNA1-3について解析を行った。csRNA1-3は前年度に解析を行ったcsRNA1-1, csRNA1-2と塩基配列の相同性が高いことからcsRNA1-1, csRNA1-2と類似の機能を持つことが予想された。実際、csRNA1-3の標的分子をデータベースで検索すると、csRNA1-1, csRNA1-2と共通する標的分子が複数存在することが明らかとなった。そこで、csRNA1-3欠損株を作製し、csRNA1-1, csRNA1-2と共通する標的分子の１つであるⅣ型線毛オペロンのpilTの発現量の変化を調べた。その結果、野生株と比較してcsRNA1-3欠損株ではpilTの発現量に有意な差は見られなかった。そこでpilT以外の標的分子（licD1等）についても発現量の変化を調べたが、有意な差は認められなかった。これらの結果からcsRNA1-1, csRNA1-2がcsRNA1-3欠損の影響を相補している可能性が考えられた。そこで、csRNA1-1, csRNA1-2, csRNA1-3欠損株を作製し、pilTの発現量をcsRNA1-1, csRNA1-2欠損株と比較した。その結果、csRNA1-3の有無はpilTの発現量に影響を与えなかった。以上の結果から、少なくとも今回用いている培養条件ではcsRNA1-3はcsRNA1-1, csRNA1-2と同様の機能は示さないことが明らかとなった。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究課題は口腔常在菌が主な起因菌となる感染性心内膜炎を対象とし、その発症に関わる細菌の病原性調節機構を解明し、新たな感染症治療法開発の基盤となる知見を得ることを目的としている。2017年度は感染性心内膜炎の主要な起因菌の1つであるStreptococcus sanguinisを対象とし、低分子RNA（sRNA）による病原性の調節機構の解析を行った。具体的にはS. sanguinisのsRNAのうち、二成分制御系CiaRHシステム依存性のsRNA（cia-dependent small RNA: csRNA）について、その標的分子の検索を行った。その結果、細菌の運動や、組織への付着、外来遺伝子の取り込みなど細菌の病原性発現に重要な働きをすると考えられるⅣ型線毛をコードするオペロンの構成遺伝子であるpilTがcsRNA1-1, csRNA1-2の標的となること、また、これらのcsRNAがS. sanguinisのバイオフィルム形成能の調節に関わることなどが明らかとなった。これらの成果についてまとめた原著論文が国際誌に掲載された。2018年度は前年度の研究内容を更に発展させる目的でS. sanguinisのcsRNA1-3の解析を行った。その結果、csRNA1-3はcsRNA1-1, csRNA1-2との塩基配列の相同性に関わらず、csRNA1-1, csRNA1-2と同様の機能を示さないことが明らかとなった。以上の成果が得られていることから、本研究課題の研究計画の内、「S. sanguinisの環境適応・病原性発現に関与するsRNA の検索」、「S. sanguinisのsRNA の標的分子の検索」、及び、「S. sanguinisのsRNA 欠損株の作製とその性状の解析」について、一定の進捗がみられていると判断できる。よって、研究全体の進捗状況としては概ね順調と判断した。
|
| 今後の研究の推進方策 |
Ⅳ型線毛関連因子PilTについて、その欠損株を作製し、S. sanguinisのバイオフィルム形成能などの病原性に関与する性質に与える影響を検討する。さらに、S. sanguinisの他のcsRNAについても、標的となる遺伝子のうちバイオフィルム形成や宿主細胞への付着など本菌の環境適応への関与が予想される分子を中心として解析することでcsRNAによるS. sanguinisの病原性調節メカニズムの一端が解明できるものと期待される。また、S. sanguinisと同様に感染性心内膜炎の起因菌となるStreptococcus oralis等、他の口腔レンサ球菌についても平行して同様の解析を進めることを計画している。複数種の菌で同様の機能を示すsRNA等の環境適応や病原性発現の調節因子を解明することで、細菌の病原性制御機構の解析を推進することが可能になると考えられる。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
当該年度の研究内容のうち、S. sanguinisのcsRNA1-3欠損株および、csRNA1-1, csRNA1-2, csRNA1-3欠損株の作製とその性状解析において、想定よりも時間を要したことなどにより、当初予定していた実験の一部が行えなかったため、次年度使用額が生じた。これらの実験については次年度使用額を合わせた助成金を用いて2019年度に行う予定である。
|
