| 研究課題/領域番号 |
17K11628
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| 研究機関 | 昭和大学 |
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研究代表者 |
深町 はるか 昭和大学, 歯学部, 助教 (10433799)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 歯周病原細菌 / ヌクレアーゼ |
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| 研究実績の概要 |
肺炎は、日本において死因別死亡率で第3位を占める感染症で、年齢とともに肺炎での死亡率が増加している。肺炎の主要な原因細菌は肺炎球菌や肺炎桿菌であるが、検体中からは口腔内の歯周病原性細菌の検出頻度が報告されている。しかしながら、肺炎感染において歯周病原性細菌が共作用した場合の病原因子は明らかとなっていない。そこで、本研究では、肺炎球菌および肺炎桿菌における歯周病原性細菌の役割を解明するために、歯周病原性細菌の産生する物質に着目し、肺炎の病態（感染成立や病巣の拡大、増悪）における相互作用を解明する。申請者らがこれまでに、歯周病原性細菌のnucleaseが感染成立に重要な因子であることを同定した。この歯周病原性細菌の産生するnucleaseが肺炎の病態形成に果たす役割を培養細胞系およびマウス感染モデルを用いて解明する。
本年度は、昨年度の自然免疫系での解析に続き、上皮系培養細胞を用いて、歯周病原性細菌Prevotella intermediaの産生するnucleaseによる肺炎球菌および肺炎桿菌の定着に及ぼす影響を解析した。nucleaseの共存下では、肺炎球菌および肺炎桿菌の定着が優位に上昇した。気道における肺炎球菌受容体として血小板活性化因子（platelet-activating factor、PAF）が同定されている。そこで、細胞のmRNAを調整し、PAF受容体の発現量をリアルタイムPCRで定量したところ、発現が誘導されることが明らかになった。マウス感染実験に向けての予備実験を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
平成29年度に産前産後休暇、育児休暇を取得したため、当初の予定から1年遅れて計画を進行しているため、申請時の計画からは遅れている。今年度は、上皮細胞培養系を用いて、歯周病原性細菌Prevotella intermediaの産生するnucleaseによる肺炎球菌および肺炎桿菌の定着に及ぼす影響を解析した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度は、マウスモデルを用いて、肺炎球菌感染時の肺炎球菌レセプターの発現量や、そのアンタゴニストを用いて感染への影響を評価する。また、本学で、無菌マウスの飼育が可能になり、繁殖に成功し実験が可能となったため無菌マウスに細菌の単独感染や歯周病原性細菌と共感染させたときの生存率等を評価する。
CRISPR/Cas9システムを用いたP. intermediaの遺伝子欠損変異株作製に関しては、菌体へのプラスミドの導入にエレクトロポレーション法を用いたが、欠損株の作製には至っていないため、E. coliとのmatingを利用した方法を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
令和元年度の研究内容のうち、培養細胞を用いた実験に想定よりも時間を要したことにより、当初予定していたマウスの感染実験については予備実験のみ行ったため、次年度使用額が生じた。これらの実験については、次年度使用額を合わせた助成金を用いて令和2年度に行う予定である。
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