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2017 年度 実施状況報告書

肥満による変形性膝関節症の発症機構の解明とCCN2によるその制御効果の検討

研究課題

研究課題/領域番号 17K11641
研究機関岡山大学

研究代表者

西田 崇  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 准教授 (30322233)

研究分担者 久保田 聡  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (90221936)
滝川 正春  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (20112063)
服部 高子  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (00228488)
青山 絵理子  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (10432650)
高江洲 かずみ (河田かずみ)  岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (10457228)
研究期間 (年度) 2017-04-01 – 2020-03-31
キーワード軟骨細胞 / アンジオテンシンII / CCN2/CTGF / 肥満 / 変形性関節症 / 局所性RAS / AT1R / AT2R
研究実績の概要

肥満が変形性関節症(OA)のリスク因子であることはよく知られているが、肥満によって増加した脂肪組織がOAに対してどのような影響を及ぼすのかは未だ不明である。本研究課題の目的は全身の脂肪組織由来のアンジオテンシンII (ANG II)が軟骨細胞にどのような影響を及ぼすのかをin vitro及びin vivoの実験系を用いて明らかにすることである。当該年度では、培養軟骨細胞を用いたin vitroの実験系を中心に解析した。以下にその結果を示す。1.ヒト軟骨細胞様細胞株HCS-2/8、ラット初代関節軟骨細胞、ラット初代骨端軟骨細胞にプロレニン受容体 (PRR)、アンジオテンシン変換酵素(ACE1)、アンジオテンシン受容体(AT1R、AT2R)遺伝子が発現していることを確認し、軟骨細胞自身によるANG II産生の可能性を示唆した。2. HCS-2/8細胞にANG IIを添加すると、ANG IIの濃度に依存して細胞増殖の指標であるPCNAの産生量は増加した。また、軟骨細胞の分化の指標である硫酸化グリコサミノグルカン量も上昇傾向を示した。3. HCS-2/8細胞にANG IIを添加し、anabolic factor であるCCN family protein 2/結合組織成長因子(CCN2/CTGF)及びcatabolic factorであるMMP9の産生量を解析したところ、CCN2はANG IIの濃度に依存して増加し、MMP9の産生量は逆に減少した。4. HCS-2/8細胞において、PRR、ACE1、AT1R、AT2Rの遺伝子発現レベルはCcn2をノックダウンすることで有意に上昇した。これらの結果から全身由来のANG IIではなく、CCN2によって制御される軟骨組織由来の局所のANG IIが、オートクリン/パラクリンに作用して軟骨細胞の増殖と分化を制御していることが示唆された。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

平成29年度の研究実施計画では主にin vitro解析に主眼を置いていたため、その点は概ね順調に伸展していると考えている。しかし、ラット膝関節部の内側側副靭帯を切断するOAモデルの作製は未だ成功していない点、及びCRISPR-Cas9システムによるゲノム編集技術を用いて、アンジオテンシンII受容体AT1Rをノックアウトした軟骨細胞の作製には未だ着手できておらず、これらの点を考慮すると、平成29年度の研究進捗状況はやや遅れていると判断した。

今後の研究の推進方策

平成29年度に着手できなかったCRISPR-Cas9システムによるAT1Rのノックアウト軟骨細胞の作製を急ぐと共にOAモデルラットの膝関節部の組織切片を作製し、AT1R及びAT2Rの関節軟骨組織での局在を調べる。また、1ヶ月齢のTamoxifen誘導性Ccn2欠損マウスにTamoxifenを投与した後に高脂肪食を与えて飼育を開始し、Ccn2をノックダウンしたマウスを肥満状態にした時の膝関節の状態を検討する。

次年度使用額が生じた理由

平成29年度の研究実施計画ではCRISPR-Cas9システムを用いたアンジオテンシンII受容体AT1Rをノックアウトした軟骨細胞の作製が含まれていたが、軟骨細胞におけるアンジオテンシンIIの作用を解析するのに、当初予定よりも時間がかかり、CRISPR-Cas9システムによるゲノム編集作業に未だ着手できていない。そのため、ガイドRNA等の作製にかかる費用が次年度に繰り越されている。平成30年度ではすぐにゲノム編集作業に着手し、平成30年度に請求する助成金と合わせて当初の研究実施計画を遂行する予定である。

  • 研究成果

    (30件)

すべて 2017 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (5件) (うち国際共著 3件、 査読あり 4件、 オープンアクセス 5件) 学会発表 (23件) (うち国際学会 3件) 備考 (1件)

  • [国際共同研究] Department of Orthopedic surgery, UCLA(米国)

    • 国名
      米国
    • 外国機関名
      Department of Orthopedic surgery, UCLA
  • [雑誌論文] Novel role of CCN3 that maintains the differentiated phenotype of articular cartilage.2017

    • 著者名/発表者名
      Janune, D., Abd El Kader, T., Aoyama, E., Nishida, T., Tabata, Y., Kubota, S., Takigawa, M.
    • 雑誌名

      J. Bone Miner. Metab.,

      巻: 35 ページ: 582-597

    • DOI

      10.1007/s00774-016-0793-4.

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Low-intensity pulsed ultrasound (LIPUS) treatment of cultured chondrocytes stimulates production of CCN family protein 2 (CCN2), a protein involved in the regeneration of articular cartilage: mechanism underlying this stimulation.2017

    • 著者名/発表者名
      Nishida, T., Kubota, S., Aoyama, E., Yamanaka, N., Lyons, K. M., Takigawa, M.
    • 雑誌名

      Osteoarthritis Cartilage

      巻: 25 ページ: 759-769

    • DOI

      10.1016/j.joca.2016.10.003.

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Catabolic effects of FGF-1 on chondrocytes and its possible role in osteoarthritis.2017

    • 著者名/発表者名
      El-Seoudi, A., Abd El Kader, T., Nishida, T., Eguchi, T., Aoyama, E., Takigawa, M., Kubota, S.
    • 雑誌名

      J. Cell Commun. Signal.

      巻: 11 ページ: 255-263

    • DOI

      10.1007/s12079-017-0384-8.

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Regulatory mechanism of CCN2 production by serotonin (5-HT) via 5-HT2A and 5-HT2B receptors in chondrocytes.2017

    • 著者名/発表者名
      Hori A, Nishida T, Takashiba S, Kubota S, Takigawa M.
    • 雑誌名

      PLoS One

      巻: 12 ページ: e0188014

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0188014. eCollection 2017.

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] 骨リモデリングにおける骨細胞の役割2017

    • 著者名/発表者名
      西田 崇、久保田聡、滝川正春
    • 雑誌名

      Clin. Calcium

      巻: 27 ページ: 1697-1703

    • DOI

      CliCa171216971703.

    • オープンアクセス
  • [学会発表] 培養軟骨細胞のCCN2産生における低出力性パルス超音波(LIPUS)処置の作用メカニズムの解明。2017

    • 著者名/発表者名
      西田 崇、久保田聡、青山絵理子、山中信康、Karen M. Lyons、滝川正春
    • 学会等名
      第9回日本CCNファミリー研究会
  • [学会発表] Small compounds that turn on CCN family genes.2017

    • 著者名/発表者名
      Kubota, S., Hara, E. S., Akashi, S., Ono, M., Nishida, T., Hattori, T., Kuboki, T., Takigawa M
    • 学会等名
      Ninth International Workishop on the CCN Family of Genes
    • 国際学会
  • [学会発表] CCN proteins as targets for skeletal regulation theraphy2017

    • 著者名/発表者名
      Takigawa, M., Hara, C., Kamatsuki, Y., Aoyama, E., Janune, D., Furumatsu, T., Nishida, T., Hattori, T., Yamanaka, N., Kamioka, H., Ozaki, T., Kubota, S.
    • 学会等名
      Ninth International Workishop on the CCN Family of Genes
    • 国際学会
  • [学会発表] Catabolic effects of FGF-1 on chondrocytes with reduced CCN2 production and its possible role in osteoarthritis.2017

    • 著者名/発表者名
      El-Seoudi, A., Abd El Kader, T., Nishida T., Aoyama, E., Eguch, T., Takigawa, M., Kubota, S.
    • 学会等名
      Ninth International Workishop on the CCN Family of Genes
    • 国際学会
  • [学会発表] 軟骨細胞分化に関わる長鎖ノンコーディングRNAの解析。2017

    • 著者名/発表者名
      石川崇典、村瀬友里香、西田 崇、服部高子、大野充昭、古松毅之、滝川正春、久保田聡
    • 学会等名
      第30回日本軟骨代謝学会
  • [学会発表] 軟骨細胞のCCN2産生に対するセロトニン(5-HT)の制御機構の解明。2017

    • 著者名/発表者名
      堀 綾花、西田 崇、高柴正悟、久保田聡、滝川正春
    • 学会等名
      第30回日本軟骨代謝学会
  • [学会発表] Mechanism of the catabolic effects of Fibroblast Growth Factor (FGF-1) on chondrocytes and its possible role in Osteoarthritis.2017

    • 著者名/発表者名
      El-Seoudi, A., Abd El Kader, T., Nishida T., Aoyama, E., Eguch, T., Takigawa, M., Kubota, S.
    • 学会等名
      第30回日本軟骨代謝学会
  • [学会発表] 細胞外情報を統合するCCNファミリー遺伝子の糖代謝を介した制御。2017

    • 著者名/発表者名
      明石 翔、西田 崇、El-Seoudi A、滝川正春、飯田征二、久保田聡
    • 学会等名
      第58回日本生化学会中国・四国支部例会
  • [学会発表] 半月板におけるCCN2, CCN3に与える低出力パルス超音波(LIPUS)の効果。2017

    • 著者名/発表者名
      釜付祐輔、青山絵理子、古松毅之、前原亜美、山中信康、西田 崇、久保田聡、滝川正春、尾崎敏文
    • 学会等名
      第49回日本結合組織学会学術大会
  • [学会発表] 老齢マウスにおいて骨細胞由来CCN2は骨髄細胞由来CCN2よりも破骨細胞形成と骨リモデリングに重要である。2017

    • 著者名/発表者名
      西田 崇、久保田聡、横井秀基、向山政志、滝川正春
    • 学会等名
      第35回日本骨代謝学会
  • [学会発表] 軟骨細胞分化に関わる長鎖非コードRNAの骨形成における役割。2017

    • 著者名/発表者名
      石川崇典、村瀬友里香、西田 崇、服部高子、大野充昭、上岡 寛、滝川正春、久保田聡
    • 学会等名
      第35回日本骨代謝学会
  • [学会発表] 関節・成長板軟骨細胞におけるセロトニン (5-HT)によるCCN2産生の差別的制御メカニズム。2017

    • 著者名/発表者名
      堀 綾花、西田 崇、高柴正悟、久保田聡、滝川正春
    • 学会等名
      第35回日本骨代謝学会
  • [学会発表] Catabolic effects of FGF-1 on chondrocytes with reduced CCN2 production that promotes cartilage regeneration: Possible role in osteoarthritis.2017

    • 著者名/発表者名
      El-Seoudi, A., Abd El Kader, T., Nishida T., Aoyama, E., Eguch, T., Takigawa, M., Kubota, S.
    • 学会等名
      第35回日本骨代謝学会
  • [学会発表] 細胞外情報を統合するCCNファミリー遺伝子の糖代謝を介した制御2017

    • 著者名/発表者名
      明石 翔、西田 崇、El-Seoudi A、滝川正春、飯田征二、久保田聡
    • 学会等名
      第9回日本CCNファミリー研究会
  • [学会発表] 軟骨細胞におけるセロトニンによるCCN2の産生制御機構の解明。2017

    • 著者名/発表者名
      堀 綾花、西田 崇、高柴正悟、久保田聡、滝川正春
    • 学会等名
      第9回日本CCNファミリー研究会
  • [学会発表] Catabolic effects of FGF-1 on chondrocytes with reduced CCN2 production and its possible role in osteoarthritis.2017

    • 著者名/発表者名
      El-Seoudi, A., Abd El Kader, T., Nishida T., Aoyama, E., Eguch, T., Takigawa, M., Kubota, S.
    • 学会等名
      第9回日本CCNファミリー研究会
  • [学会発表] LIPUSにより半月板でのCCN2の発現・産生は増加する。2017

    • 著者名/発表者名
      釜付祐輔、青山絵理子、古松毅之、前原亜美、山中信康、西田 崇、久保田聡、滝川正春、尾崎敏文
    • 学会等名
      第36回日本運動器移植・再生医学研究会
  • [学会発表] 軟骨細胞におけるCCN3遺伝子の糖代謝を介した制御。2017

    • 著者名/発表者名
      明石 翔、西田 崇、El-Seoudi A、滝川正春、飯田征二、久保田聡
    • 学会等名
      第38回岡山歯学会
  • [学会発表] 老齢期の破骨細胞形成における骨細胞由来のCCN2の役割。2017

    • 著者名/発表者名
      西田 崇、久保田聡、滝川正春
    • 学会等名
      第59回歯科基礎医学会
  • [学会発表] 低出力パルス超音波(LIPUS)によりCCN2の発現・産生は増加する。2017

    • 著者名/発表者名
      釜付祐輔、青山絵理子、古松毅之、前原亜美、山中信康、西田 崇、久保田聡、滝川正春、尾崎敏文
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会 第40回日本分子生物学会 第90回日本生化学会大会
  • [学会発表] 細胞外情報を統合するCCNファミリー遺伝子の糖代謝を介した制御。2017

    • 著者名/発表者名
      明石 翔、西田 崇、El-Seoudi A、滝川正春、飯田征二、久保田聡
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会 第40回日本分子生物学会 第90回日本生化学会大会
  • [学会発表] CCN2とRab14の相互作用が骨・軟骨細胞の小胞輸送に及ぼす役割。2017

    • 著者名/発表者名
      星島光博、服部高子、青山絵理子、西田 崇、田中智代、久保田聡、上岡 寛、滝川正春
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会 第40回日本分子生物学会 第90回日本生化学会大会
  • [学会発表] 軟骨組織におけるメラトニン合成とその受容体発現は概日リズムを持ち、軟骨細胞の代謝に影響を及ぼす。2017

    • 著者名/発表者名
      服部高子、Shanqi Fu、桑原実穂、内田瑶子、近藤 星、林 大智、下村 侑司、高垣安紗美、西田 崇、丸山 雄介、池亀 美華、服部 淳彦、久保田聡
    • 学会等名
      2017年度生命科学系学会合同年次大会 第40回日本分子生物学会 第90回日本生化学会大会
  • [備考] 岡山大学歯学部口腔生化学

    • URL

      www.okayama-u.ac.jp/user/seika/index.html

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公開日: 2018-12-17   更新日: 2022-02-21  

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