研究課題
各種口腔癌細胞株におけるSema4Dとその受容体PlexinB1の発現をウエスタンブロット法にて解析した．また，Sema4Dが口腔癌細胞に与える影響について，細胞増殖能をMTS assay，遊走能をMigration assay，浸潤能をInvasion assayでそれぞれ検討した．HSC-2，HSC-3，SAS細胞はSema4Dおよびその受容体PlexinB1を発現していた．MTS assayでは，HSC-2，HSC-3，SAS細胞のすべてにおいて，Sema4D添加により細胞増殖の促進を認めた．Migration assayでは，Sema4D添加により濃度依存的に遊走した細胞の増加を認め，細胞遊走能の促進を認めた．Invasion assayにおいても，Sema4D添加により，濃度依存的に浸潤した細胞の増加を認め，細胞浸潤能の促進を認めた．マウスの大腿骨から骨髄細胞を採取し，破骨細胞の形成能の検討を行った。C57BL/6Jマウスの大腿骨から骨髄細胞を回収し、macrophage colony-stimulating factor（M-CSF）を添加した．翌日，浮遊している細胞のみを回収し，M-CSFを添加して3日間培養を行った．その後，浮遊細胞は洗い流し，接着細胞のみを再度回収して，Bone marrow macrophages（BMMs）としてプレートに播種し、Sema4Dを添加して6日間培養した．培養後，酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ染色（TRAP染色）を行った．破骨細胞数の評価として，3核以上をもつTRAP陽性の細胞を破骨細胞として計測した．Sema4D添加群においてTRAP陽性である破骨細胞数は有意に増加した．
2: おおむね順調に進展している
In vitroの実験は予想通りの結果が得られており、In vivoの実験のための準備が整って来ている．
各種口腔扁平上皮癌細胞株にRNA干渉によりSema4D発現抑制細胞株を作製し，ヌードマウス大腿骨傍骨膜に移植を行い，骨浸潤モデルでのその影響を検討する予定である．現在、HSC-2のSema4D発現抑制細胞株は作製済である．移植後，経時的に腫瘍サイズを計測し，4週後に大腿骨を摘出し，組織学的に解析する予定である．
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すべて 国際共同研究 (2件) 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件)
International journal of oncology
巻: 51 ページ: 625-632
10.3892/ijo.2017.4050
