| 研究実績の概要 |
本研究は唾液腺の老化における唾液分泌障害に対するDEC１の関与を検討することとした。生後３ヵ月齢、２４ヵ月齢のC５７BL６およびDEC１ノックアウトマウスの唾液腺（顎下腺・舌下腺）を採取し、RNAおよびタンパクを抽出した。採取した唾液腺組織からRNAをmiRNeasy Mini Kit (Qiagen) を用いて抽出し、DNAマイクロアレイおよびmiRNAマイクロアレイを用いて網羅的遺伝子発現解析[GeneSpring解析ソフト(Agilent)]を行った。さらに、マイクロアレイで得られたデータはIPA (Ingenuity Pathway Analysis)解析から予測される生物学的過程、転写経路およびネットワークの探索を行った。遺伝子(S100A８, AQP５, MUC７, MUC７, HIN３, STATH, MYB, NFIB等) およびmiRNA (miR-15a, miR-21, miR-Let７c, miR-１４３, miR-１４６b, miR-１５０, miR-３７８a) が候補 遺伝子およびmiRNAとして同定された。特異的TaqMan®プローブを用いてQuantStudio ６ Flexリアルタイム PCR システム(Applied Biosystems)によりmRNAおよびmiRNAの定量化した。また、ウェスタンブロッティング法によるタンパク質の検討は、ImageQuant Las ４０００ Miniで観察した。DNAマイクロアレイ解析により同定された遺伝子(MUC, AQP５等)の免疫組織化学染色を行った。老化モデルマウスの唾液腺を用いて網羅的遺伝子発現解析及びmicroRNA発現解析により、唾液腺の老化のメカニズムを明らかにした。
|
