| 研究課題/領域番号 |
17K15055
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
藤原 摩耶子 京都大学, 野生動物研究センター, 特別研究員(RPD) (00794504)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 卵巣 / 移植 / 卵子 / 卵胞 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は希少動物の保全を目的とした生殖介助技術の開発をを目的とし、野生肉食動物のモデルとしてイヌとネコを用いて、免疫不全ラットへの卵巣組織の移植による原始卵胞の発育誘導法の確立を目指して取り組んできた。
イヌの卵巣を用いた免疫不全ラットへの移植実験では、血管新生を促進する成長因子を利用するとともに、移植組織の定着を促す足場となりうるマトリゲルを用いることで、免疫不全ラットの皮下へ移植後も定着し、生存できることがわかった。凍結後の卵巣組織についても移植を行い、ガラス化凍結法を行った卵巣組織は9週間の移植によって原始卵胞からより発育の進んだ二次卵胞へ発育を誘導することができた。この結果から、この移植法は移植した卵巣組織内で原始卵胞から二次卵胞まで卵胞発育を誘起することが可能であることを示すとともに、ガラス化凍結法で卵胞発育能を保持した状態で卵巣組織を保存できることが分かった。
さらに、野生動物の卵巣組織の凍結保存も進行している。昨年度はより多くの動物園からの協力を得られ、これまでに11動物園からの協力を得て、これまでの合計で32件、19種の野生動物の卵巣を受け入れ、凍結保存・蓄積を行っている。今後、本研究によって卵胞発育を促す卵巣組織移植法が確立された折には、これらの野生動物の卵巣組織を用いて野生動物の未成熟卵胞の発育誘導を目指す予定である。
昨年度は、上記のイヌの卵巣を用いた研究成果を論文にまとめ、Scientific Reportsに論文を発表した。さらに、5つの国際学会・国際シンポジウム、5つの国内学会・国内シンポジウムで発表を行い、一般書の執筆、アウトリーチ活動により、社会に向けた情報発信も行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の予定では、移植実験は新鮮な卵巣のみを用いることを想定していた。しかし、本研究とは別のイヌの卵巣組織の凍結保存の研究が順調なことから、凍結保存した卵巣組織も融解後に移植実験に供試し、良好な結果を得ることができた。このことから、凍結組織由来卵子による産仔作出の可能性が広がり、より野生動物への応用に向けて実践的な技術モデルを提示することができた。
当初予定していた免疫不全ラットの管理や手術補助、助言を仰ぐ、同じ京都大学の研究協力者の先生が遠方の他大学に移動になり、研究への助言等、協力関係は継続してもらえるものの、ラットの移植実験・管理の継続が危ぶまれた。しかし、移動される前に手術方法の確認を入念に行うとともに、同じ研究施設の別の先生・技術員の方の協力も得られ、移植実験を継続し、イヌの卵巣組織移植の研究を簡潔させることができた。現在はその方々も移動されたため、移植法の改良に向けての次の実験には新たに施設を探さなければならなくなったが、候補先の先生や研究協力者の先生と相談を重ねている。
また、一昨年7月から昨年8月末まで、出産・育児により研究を中断したが、その間にも研究会での発表や講演、論文執筆を継続することで、研究を推進し、研究再開後に国際誌へ論文を発表することができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまで移植実験を実施した施設では、研究協力者の先生、及びその後引き継いでいただいた先生や技術員の方も移動になったため、免疫不全ラットを用いた研究継続は困難になった。別の研究施設の研究者と共同研究の相談を行っていたが、さらにその先生も海外移動されたため、研究の再開に向けて、他の候補先の先生や研究協力者の先生との話し合いを行っている。
現在の移植手法では、レシピエント動物腹腔内への卵胞刺激ホルモンの投与も行ったが、移植後、原始卵胞から二次卵胞への発育は見られたものの、その数は少なく、さらに大きな胞状卵胞への発育は見られなかった。生殖能力を持った成熟卵子の獲得には胞状卵胞への発育が欠かせないため、今後はレシピエント動物体内でより効率的に卵胞を維持し、二次卵胞、さらに胞状卵胞にまで発育する卵巣組織移植法の確立を目指す。具体的には、卵巣組織の移植の際のレシピエント動物の卵巣の有無によるホルモン分泌の影響、移植卵巣内の卵子発育へ与える影響を調べる。これにより、免疫不全動物の体内でイヌとネコの卵胞発育を誘導する可能性を探る。。らに、レシピエント動物の生殖ホルモン分泌の解析結果を踏まえ、内因性のホルモンを補う形で生殖ホルモンを投与し、外因性の生殖ホルモン刺激による卵胞発育へ与える影響を解析する。内因性と外因性（外部からの投与）による移植組織内の卵胞発育に与える影響を複合的に調べることで、卵巣組織移植による卵胞発育法の確立を目指す。
また、本研究によってモデル動物を用いて卵胞発育を促す卵巣組織移植法を見いだせた際には、実際に野生動物への応用実験を想定している。そのため、引き続き野生動物が動物園等で死亡した際、または獣医学的理由により卵巣を切除した際には卵巣を受け入れ、凍結保存・蓄積を行っていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
出産・育児のため、研究を1年以上中断した。さらに、その間に移植実験を行う研究協力者が移動され、その後引き継がれた研究者も移動されるなど、研究再開後も移植実験を新たに始めることが困難な状況になったため、論文執筆、データ解析等に専念した。そのため、物品等の購入が発生せず、次年度使用額が生じた。
移植実験を行う施設が見つかり次第、新たに実験環境を整える必要がある。これには、免疫不全動物の購入費、維持費に加え、培地や血清、増殖因子、解析用の試薬類等の消耗品が必要となる。これらに加え、学会発表や海外との共同研究のための旅費、研究資料輸送費に、次年度使用額と翌年度分として請求した助成金を使用する。
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