| 研究実績の概要 |
タンパク質情報を持たないノンコーディングRNAを骨格として形成される核内構造体(核内RNA顆粒)が重要な生理機構に関与していることが近年明らかになってきている。核内RNA顆粒はRNA-タンパク質相互作用を介して形成されることから、これらの生理機構を解明するためには骨格となるRNAのみではなく構成因子やその形成機構を明らかにすることが重要となってくる。
本年度は、昨年度にFLAGタグ融合DBC1を免疫沈降した後にRNase処理をおこないLC-MS/MSにより同定したRNA依存的にDBC1と相互作用する5つのタンパク質(DIRBP : DBC1 interacting RNA binding protein A, B, D, E, F)について詳細な解析をおこなった。まず、これらのタンパク質についてFLAGタグ融合DBC1を免疫沈降したサンプルをWestern blottingで相互作用を確認したところ、RNase処理によりDBC1との相互作用が消失もしくは減少した。次に、免疫染色によって細胞内局在を観察したところ、DIRBP_AとBについてはDBC1ボディと共局在していた。また、RNAポリメラーゼ阻害剤により、DBC1ボディの消失とともにこれらの局在も消失していた。このことから、DBC1ボディの新規構成因子としてDIRBP_AとBを同定することができた。現在、DIRBP_AとBがDBC1ボディの形成・維持にどのように関与しているかを解析するため、これらの因子のsiRNAをおこなっている。
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