| 研究実績の概要 |
研究期間最終年度では，実施計画の当該年度の計画に従い，Smith-Lemli-Opitz症候群 (SLOS) モデルラットから得られた血清に対して，前年度までに得られた4種のモノヒドロキシ-7-デヒドロコレステロール (4α-, 4β-, 24S-及び25-ヒドロキシ-7-デヒドロコレステロール) 標品と照らし合わせることで，生体試料中の存否の確認を行った．すなわちSLOSの新規診断マーカーとしてのモノヒドロキシ-7-デヒドロコレステロールの妥当性を評価した．SLOSモデルラットは7-デヒドロコレステロールレダクターゼ阻害剤であるAY9944を妊娠ラットに投与後，産まれた仔ラットに経時的に摂取させて調製した．分析の方法論にはLC/ESI-MS/MS (Waters社の質量分析計 Premier XEにLC-2695eクロマトグラフを接続した装置を使用)を用いた．7-デヒドロコレステロール骨格の共役ジエンに選択的に反応する，我々の開発したDAPTADを誘導体化試薬に用いた．なお，DAPTADにより誘導体化前と比較し，300倍の感度向上が達成された．SLOSモデルラット及びコントロールラットの血清それぞれ5 μLをアセトニトル50 μLで除タンパクのみの簡単な前処理の後，DAPTAD誘導体化し，血清1 μL相当分を装置に付した．SLOSモデルラットの血清中から, 4α-及び4β-ヒドロキシ体が明瞭に検出された．一方，24S-及び25-OH体はSLOSモデルラット及びコントロールラットの血清中からは検出されなかった．以上の結果から，7-デヒドロコレステロールの側鎖のヒドロキシ体よりも，ステロイドA環4位のヒドロキシ体がSLOSの診断マーカーとして期待されるという結果を得た．
|
