| 研究課題/領域番号 |
17K15538
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
岡野 大輔 弘前大学, 医学研究科, 助手 (00719023)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | リンパ管 / 三次元培養 / 形態形成 / CD73 / ライブイメージング |
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| 研究実績の概要 |
積層培養法による三次元リンパ管培養組織ではリンパ管内皮細胞が平面的に管腔ネットワークを形成し、そこから出芽・伸長・移動・吻合を繰り返して三次元的な管腔ネットワークを構築する。ライブイメージング解析の結果、CD73ノックダウンにより平面的な管腔ネットワーク形成は遅延したが、その後のリンパ管新生と管腔ネットワーク構築は抑制されなかった。加えて、アデノシンレセプター（ADOR）のアゴニストを投与するとリンパ管ネットワーク構築が亢進された。アデノシンの産生抑制、過剰投与の両条件ともリンパ管ネットワーク構築が亢進されたため、リンパ管内皮細胞と線維芽細胞それぞれに発現する各種ADORのリンパ管形態形成における役割が異なるのではないかと予想している。
また、線維芽細胞経由でリンパ管形成が制御されていたことからリンパ管成長因子が関与していると考えられたため、VEGF、VEGF-C、Angiopoietin-1/2などのリンパ管成長因子の発現解析をすると、この培養組織ではVEGF-CとAngiopoietin-2の発現が認められた。VEGF-Cはリンパ管新生の主要な因子として知られており、Angiopoietin-2は管腔形成を特に制御していると考えられているが形態形成運動にどのような影響を及ぼすのか不明であった。ライブイメージング解析を行ったところ、Angiopoietin-2ノックダウンにより平面的な管腔ネットワーク形成が遅延した。CD73はこれらのシグナリングのバランスを調整することでリンパ管形態形成を制御しているのではないかと考え現在解析を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
接着分子の発現解析を当初予定していたが、形態形成運動の解析のためにはdynamic cell（細胞突起を盛んに伸ばしよく移動する細胞）とstatic cell（あまり移動しない細胞）の細胞運動解析が有用であると思われたため計画を変更し、実験条件の設定などに時間を要している。また、ADORアゴニスト投与試験の結果が予想外であったため、新たにAngiopoietin-2の機能解析実験などを行ったためそれに時間を要した。
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| 今後の研究の推進方策 |
CD73はリンパ管内皮細胞のアデノシンシグナリングだけでなく、VEGF-C、Angiopoietin-2を介したシグナリングのバランスを調整することでリンパ管形態形成を制御しているのではないかと考え解析を進めている。dynamic cellとstatic cellの細胞運動解析に加え、リンパ管形態形成における各イベント（管腔形成・伸長・移動・吻合・プルーニングなど）の評価法を確立し、各アデノシンレセプターの阻害剤試験によりリンパ管形態形成におけるそれぞれの役割について解析を行う計画である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞接着分子の発現解析を行う予定であったが、計画を変更し、形態形成運動解析とリンパ管成長因子などの発現解析を行った。差額により次年度使用額が生じた。より詳細な形態形成運動解析のためのレンチウイルスベクターの購入に充てる予定である。
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