研究課題
2019年度は、2018年度に開発した糖化ステロール群の合成機構の解析システムを用いて、糖化ステロールの一種として新たに同定したコレステリルガラクトシド（GalChol）の合成機構の解析を行った。具体的には、グルコシルセラミド分解酵素（GBA1、GBA2）がGalChol合成を行う可能性について検討した。酵素源として、組換えヒトGBA1（セレザイム）またはヒトGBA2を過剰発現させたヒト胎児腎細胞（HEK293T）を用いた。基質として、蛍光ラベルされたコレステロール（25-NBD-コレステロール）をガラクトースのアクセプターとして、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルスフィンゴシン、UDP-ガラクトースをガラクトースドナーとして用いた。37℃で2時間酵素反応を行い、酵素反応液から抽出した脂質を薄層クロマトグラフィーで分離し、蛍光ラベルされたGalCholの合成量を測定した。同様の実験を蛍光ラベルされていないコレステロールを用いて行い、GalChol合成量を高速液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析法で測定した。その結果、GBA1とGBA2はガラクトシルセラミド分解活性をもち、ガラクトシルセラミドのガラクトースをコレステロールに転移してGalCholを合成することがわかった。ガラクトシルスフィンゴシンならびにUDP-ガラクトースはGalChol産生のガラクトースドナーとしては利用されないことがわかった。これらの結果より、GBA1とGBA2はグルコシルセラミド分解酵素としてだけでなく、β-ガラクトシダーゼとしてガラクトシルセラミド分解活性をもち、GalChol合成酵素としても機能することが明らかになった。
すべて 2020 2019 その他
すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (4件) (うち国際学会 2件)
Journal of Biological Chemistry
巻: 295 ページ: 5257-5277
10.1074/jbc.RA119.012502
