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本研究では、膵癌の高度メチル化遺伝子として同定したIRX4（Iroquois homeobox 4）遺伝子について、１）IRX4発現回復の癌細胞に与える影響、２）癌化におけるIRX4メチル化や発現変化の詳細な解析により膵癌形成過程におけるIRX4高度メチル化の役割を明らかにすることを目的とした。
IRX4はホメオボックス遺伝子であるため、平成３０年度は、IRX4発現の有無による遺伝子発現の変化をマイクロアレイで解析した。２種の膵癌細胞株、PK-1、PK-9のTetリプレッサー発現細胞株（親株）とそれらの細胞株から派生するIRX4発現誘導細胞株のテトラサイクリン投与前後の細胞からRNAを調製し、ラベル化cRNAのマイクロアレイスライドへのハイブリダイゼーションにより転写因子IRX4の下流に位置する遺伝子を網羅的に探索した。その結果、CRYAB、CD69、IL32など癌抑制活性を有する複数の遺伝子がIRX4発現に伴って発現上昇することを見出した。これらの遺伝子の発現ベクターを作製し、PK1、PK9細胞へのトランスフェクション後、コロニー形成能を検討したところ、３つの遺伝子すべてでベクタートランスフェクションに比べ、コロニー形成能の著しい抑制効果が見られた。また、昨年度の研究によりPK-1、PK-9膵癌細胞株はIRX4発現誘導により細胞増殖が著しく阻害され、その原因としてアポトーシスが引き起こされていることが明らかとなった。これらの結果は、膵癌におけるIRX4の高度メチル化、発現抑制はCRYAB、CD69、IL32など癌抑制活性を有する複数の遺伝子を介して、膵癌細胞の増殖に影響を及ぼす可能性を示唆した。
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