| 研究課題/領域番号 |
17K15762
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| 研究機関 | 就実大学 |
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研究代表者 |
原 愛 (野上愛) 就実大学, 薬学部, 助教 (30614953)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | L-アスパラギナーゼ / L-asparaginese / 薬物アレルギー / アレルギー / 小児白血病 / 急性リンパ性白血病 / オマリズマブ / 中和抗体 |
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| 研究実績の概要 |
L -アスパラギナーゼ（L-ASP）は、小児急性リンパ性白血（ALL）の第一選択薬であるが、高頻度でアレルギー反応を生じるため治療中止を余儀なくされ、ALLの治療完遂が困難となる。ALL治療においてL-ASPアレルギー発症が重要な課題であるにも関わらず、L-ASPアレルギーの有効な予防・治療方法はなく、L-ASPアレルギーの特徴も解明されていない。本研究は、患者への負担を最小限に出来る微量血清を用いた「L-ASPアレルギーのin vitro評価系」と「L-ASP特異的抗体検出チップ」を開発し、L-ASPアレルギーを迅速かつ高感度に診断する方法を構築する。さらに、L-ASPアレルギーに対するIgE中和抗体の有用性を明らかにする。これらを通じて、L-ASPアレルギーの予見と克服を可能にし、白血病治療に貢献することが本研究の目的である。
今年度は、L-ASPアレルギーのモデルマウスの血清を用いて、L-ASPに対する中和抗体の影響を検討した。L-ASPアレルギーのモデルマウスの血清は、前年度よりもさらに臨床に近い条件で動物を感作して作製した。L-ASPに対する中和抗体の影響は、前年度に開発した「L-ASPアレルギーのin vitro評価系」を用いて検討した。この評価系では、L-ASPアレルギーのモデルマウスの血清を用いてIgE受容体（FcεRI）を発現する培養肥満細胞（RBL-2H3細胞）を感作すると、L-ASP抗原を添加することで肥満細胞が活性化する結果が得られている。L-ASPアレルギーのモデルマウスより採取した血清を、プロテインGセファロースを加えてIgGクラス抗体を全て吸着除去した血清では、除去前と比較して、肥満細胞が活性化が低下した。これより、L-ASPアレルギーのモデルマウスにおいて、プロテインGセファロースで吸着可能なIgG抗体が中和抗体として出現することが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度は、L-ASPに対する中和抗体の影響を明らかにするために、血清中IgG除去後のL-ASPアレルギー反応性の評価を行う計画と、前年度に達成できていなかった「L-ASP特異的抗体検出チップ」の代替として、「ELISA法を応用したLASP特異的抗体の定量系」の開発に取り組む計画をしていた。これまでに、L-ASPアレルギーのモデルマウスにおいて、プロテインGセファロースで吸着可能なIgG抗体が中和抗体として出現することが示唆された。一方、前年度に達成できていなかった「ELISA法を応用したLASP特異的抗体の定量系」の開発を行う計画については、検討で使用するL-ASPアレルギーのモデルマウスの血清を作製した。申請時の計画とは異なり、今年度は産前・産後休暇と育児休業を取得したため、今年度は4か月間のみが研究実施期間であった。そのため、「ELISA法を応用したLASP特異的抗体の定量系」の開発についてはやや遅れており、今年度作製したマウス血清を用いて、次年度に取り組む計画である。
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| 今後の研究の推進方策 |
L-ASPアレルギーのモデルマウス血清を用いて「L-ASPアレルギーのin vitro評価系」の開発に成功し、L-ASPアレルギーはIgEを介した反応であり、L-ASPアレルギーのモデルマウスに対して抗IgE抗体が有効であることが明らかになった。今後は、ヒト高親和性IgE受容体を発現した肥満細胞株であるRS-ATL8細胞をL-ASP の治療経験がある患者血清で感作してL-ASP刺激を行うことにより、L-ASPアレルギー患者の血清が肥満細胞を活性化させるIgEを含有するか否かについて検討する。この実験系を用いて、抗IgE抗体であるオマリズマブの患者に対する有効性についても、in vitroで評価できるようにする。また、今年度作製したL-ASPアレルギーのモデルマウスの血清を用いて、「ELISA法を応用したLASP特異的抗体の定量系」の開発に取り組み、アレルギー発症の契機となるL-ASP特異的IgE、ならびに臨床上薬効を低下させることで問題となるL-ASPに対する中和抗体としてのIgGの定性・定量化を行う。さらに、L-ASPアレルギーを抑制 するために抗IgE抗体であるオマリズマブを併用してもL-ASPによる治療効果には影響しないことを明らかにする目的で、ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞株であ るMOLT-4、CCRF細胞を用いた検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
物品費の支出が当初の計画よりも少なかったため次年度使用額が生じた。その主な理由として、研究代表者が産前・産後休暇および育児休業を取得し、研究が中断したことが挙げられる。学会発表に伴う旅費の支出やその他の支出は、研究が再開後に計画通り実施した。次年度使用額は、 研究再開後に物品費として主に使用する予定である。
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