| 研究課題/領域番号 |
17K15884
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| 研究機関 | 藤田保健衛生大学 |
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研究代表者 |
越智 拓 藤田保健衛生大学, 医学部, 助教 (70527704)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 内因性カンナビノイド / ドーパミン / PC12 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ドーパミンシグナリングに対する内因性カンナビノイドシステム（ECS）の影響について検討することを目的としたものであり、今年度は、PC12細胞におけるECS関連因子の発現状態の確認と質量分析法によるドーパミン定量法の確立について検討した。
ドーパミン神経細胞のモデルとしてPC12細胞を用いるにあたり、PC12細胞は神経成長因子（NGF）により神経様突起を伸長させ神経細胞様に分化することが知られている。そこで、PC12細胞の分化に伴いECS関連因子の発現状況も変化する可能性が示唆されるため、これらについて検討した。分化させていないNGF(-)-PC12細胞において、ECS関連因子の遺伝子発現を確認したところ、CB1、PLCβ4、MGLL、DAGLα、NAPE-PLD、FAAHの発現を認め、CB2の発現は明らかではなかった。一方、NGFにて分化させたNGF(+)-PC12ではNGF(-)-PC12に比し、CB1の発現が顕著に上昇していた。またタンパクレベルにおけるCB1の発現状況を確認したところ、NGF(+)-PC12において有意な上昇が認められた。
また、ドーパミン定量法の確立については、標準品を用いた検討により、前処理方法として、Bond Elut PBAによる固相抽出、およびトリメチルシリル化を行なった後、ガスクロマトグラフ質量分析装置を用いて測定することで、ドーパミン定量が可能となった。さらに本定量法の実サンプルへの応用例として、NGF(+)-PC12におけるドーパミン分泌がヘキサナールによりを誘導されることを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ドーパミン神経細胞のモデルであるPC12細胞の分化状態による内因性カンナビノイドシステム関連因子発現状態の変化を確認するとともに、これらの細胞におけるドーパミン動態の状況を確認するための質量分析法を確立することができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
神経成長因子（NGF）により分化させたNGF(+)-PC12をドーパミン神経細胞のモデル細胞として用い、これらの細胞におけるドーパミン動態に対する内因性カンナビノイドの影響について検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究計画書に基づき、研究活動遂行に必要な物品を購入してきたつもりではあるが、細かいところまで調整するに至らなかった。
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