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本研究ではin vivoでのmiR-29bによる腎線維症抑制を目的とした．Micro RNAのデリバリーツールとしてAAV(アデノ随伴ウイルス)を使用した．AAVは非病原性で，近年ではヒト遺伝子治療の臨床治験でも使用されている．AAVには1-11までのセロタイプが存在しており，各セロタイプは異なる組織親和性を有している．
腎臓細胞に特異的なウイルスベクターを決定するため，in vitroにて尿管上皮細胞及び腎線維芽細胞へ1-9までの各セロタイプのGFP遺伝子を搭載したAAVベクターを感染させ，フローサイトメトリーにてその感染効率を検証した．その結果、AAV2/6のセロタイプが腎臓細胞に親和性が高いことが判明した．その後マウス腎臓への経腎盂的投与により，腎臓へ効率的に遺伝子導入可能なセロタイプを検証したところ，AAV6の遺伝子導入効率が最も高いことが判明した．
また本研究ではmiR-29bを高発現するAAVベクターを作成するため，より効率よくmature体が切り出されるためのmiR-29b前駆体二次構造を検討した．結果，miR-29b-precursor体のループ構造を，先行研究でより安定性が高く，よりDicerによるプロセシングが促進される構造であると報告されているmiR-30のループ構造に置換したベクターにおいて，miR-29bの発現が最も高いことが判明した．
最終年度ではこの作成したmiR-29b高発現AAV6ベクターを腎線維症モデルマウスである，UUOマウスに投与し，腎線維症抑制の検討を行った．結果，尿管上皮細胞においてSnail1の発現を抑制することで，腎間質線維化の抑制を認めた．
本研究成果はClinical and experimental Nephrologyにて発表した（Clin Exp Nephrol
. 2019 Dec;23(12):1345-1356.）．
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