| 研究実績の概要 |
急性リンパ性白血病細胞株及び臨床検体を用いて、IKZF1, BTG1, CDKN2A, SLX4IP, TAL1, CD200/BTLA、ERGの変則V(D)J組み換えによる欠失変異を確認した。検出できたV（D）J欠失については、ダイレクトシークエンスにて、欠失部位の配列を確認し、V(D)J組み換えによる腫瘍特異的欠失が起きていることを確認した。最も欠失頻度が多いのはIKZF1であり、IKZF1欠失に注目して以後の検討を行った。急性リンパ性白血病においてIKZF1欠失は予後不良因子となることが報告されているが、大規模コホートの次世代シークエンスあるいはMLPA法による検討が中心で、これまで日常臨床で検出可能な標準検査法が確立されていない。今回我々はスクリーニング検査として利用可能なFISH法によるIKZF1欠失検出法を開発した。IKZF1遺伝子上に4箇所のRAG認識配列が報告されており、4タイプの主要な欠失バリエーションが存在する。共通して欠失が起きるexon4-7をカバーする領域をLong PCRで増幅し赤で標識し、IKZF1遺伝子の3’側を認識するBACクローンを緑で標識することで、欠失変異なしなら融合シグナル(黄)、欠失ありなら緑シグナルとなるIKZF1欠失FISHプローブを作成した。細胞株及び臨床検体を用いてバリデーションを行なった。正常検体でのカットオフ値は1.5%であり、微小残存病変の検出には不十分だが、簡便、迅速、安価に4つのタイプの欠失変異を検出することができIKZF1欠失スクリーニングに有用と思われる。
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