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Ahedの分子機能解明の為に、合成ペプチド鎖を抗原として抗Ahedウサギポリクローナル抗体を作成した。Ahed安定発現細胞株を用いて、作成した抗体の評価を行った。この抗体によりWestern解析および細胞免疫染色で特異的なシグナルを得ることが出来た。細胞分画および細胞免疫染色によってAhedは核に局在することが示された。一方で、この抗体を用いた免疫沈降法では、効率良くAhedを濃縮・回収することは難しかった。当初、Ahed-FLAG融合タンパク質発現細胞から、抗FLAG抗体あるいは抗Ahed抗体を用いて免疫沈降を行い、共沈殿するタンパク質を単離・同定する予定であったが、免疫沈降の効率の悪さから方針を変更した。Ahed-GFP融合タンパク質を安定的に発現するHela細胞を作成し、抗GFP抗体を用いてAhed-GFPタンパク質を免疫沈降し、これと共沈殿するタンパク質を単離・同定することにした。抗GFP抗体を用いた免疫沈降では効率良くAhed-GFPタンパクを得ることが出来た。免疫沈降により得られた試料をSDS-PAGEで展開し、クマシー染色を行ったところAhed-GFP発現Hela細胞特異的なバンドが複数確認された。これらのバンドを切り出して質量分析を行った結果、スプライソソーム構成タンパク質が同定された。このタンパク質がAhed-GFP発現Hela細胞由来の免疫沈降試料に特異的に存在することをWestern解析により確認した。スプライソソームは巨大タンパク質複合体である。Ahedがスプライソソームのどの構成タンパク質と結合しているのか、スプライシングのどの過程に関わっているのか、等は今後の検討課題である。
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