| 研究実績の概要 |
近年、細胞外小胞extracellular vesicles (EVs)が、細胞間コミュニケーションツールとして、生体内の様々な微小環境形成に関与することが知られている。癌細胞由来EVsも癌転移のための微小環境形成に関わることが報告されているが、その機能・役割には、依然、未解明な点が多い。本研究では、癌の血行性転移の鍵となる癌細胞の血管外脱出過程に焦点を絞り、癌細胞由来EVsがこの過程で果たす役割を明らかにすることを目的としている。平成29年度の実験では、EVsの分泌に関与するtsg101遺伝子をshRNAでノックダウンし、EV分泌抑制細胞株を作成した。これらの細胞株から回収したEVフラクションは、ウェスタンブロットによってEVマーカー(CD9,tsg101)の発現低下が減少していることを明らかにした。このtsg101ノックダウン細胞を血管内皮細胞層上に添加し、血管透過性に与える影響を検証した。その結果、tsg101ノックダウン細胞では、血管透過性の亢進が認められなかった。また、このtsg101ノックダウン細胞は、血管外脱出過程にどのような影響を及ぼすかを、tsg101ノックダウン細胞および親株をマウス尾静脈より注入し、肺への転移能で検証した。その結果、親株は肺への転移が認められたのに対し、tsg101ノックダウン細胞は、肺へ転移しないことを明らかにした。 予備実験によって証明していたEVsによる血管内皮細胞の透過性亢進が、EVs依存性に起きていることを明らかにした。平成30年度研究計画では、血管透過性を亢進させるEVs由来因子を同定することであった。しかしながら、研究計画時に想定していたEVsの表面タンパク質を分離する試薬が突然、販売中止となったため、予定した同定まで行うことが出来ず、現在のところ、血管透過性を亢進させるEVs由来因子の同定まで至っていない。
|
