| 研究課題/領域番号 |
17K16936
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
荒井 康裕 横浜市立大学, 附属病院, 助教 (90614818)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 唾液腺癌 / オルガノイド / 三次元培養 / ヒト唾液腺癌細胞株 / PDX |
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| 研究実績の概要 |
現在，6例の唾液腺腺様嚢胞癌の検体を用いて3次元培養を行い，癌組織から癌細胞株作成を試みたが、継代が１０回程度で増殖が落ちてしまう。また培養した癌細胞を移植して腫瘍形成を認めるには至っていない． 癌組織を免疫不全マウスに直接移植し，腺様嚢胞癌のＰＤＸ（Patient-Derived Xenograft)を作製し，その腫瘍から癌細胞を取り出し３次元培養すること にも試みており，6例中２例で三次元培養に成功している．
この２例のPDXから取り出した細胞株を、免疫不全マウスに移植したところ、原発腫瘍と比べて組織再現性の高い腫瘍を形成した。さらにそのうち１例では、これまでに腺様嚢胞癌で報告されているMYBL1-NFIBの融合遺伝子を有しており、RT-PCRでそのPDXから作成した細胞株からもその融合遺伝子を検出することができた。
ただし、このPDXから作成した細胞株も増殖が遅く、PDXから取り出して10回程度の継代で増殖が落ちてゆくという問題点がある。
現在PDXは安定的に継代できており、PDXから取り出して早い段階での抗がん剤asaayについて検討を進めている。また、これまで2次元培養での抗がん剤assayとしてIC50の算出をされてきた報告は多いが、3次元培養でのIC50算出の方法は多くないため、matrigelを用いた3次元培養でIC50を算出する用法を検討しており、いくつかの抗がん剤において安定した結果となってきている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
PDXから取り出した細胞を用いて、長期間の培養条件の検討を進める必要はあるが、移植すれば再現性が高く、遺伝子的にもその特徴を維持した細胞を取り出すことはできているので、おおむね順調と考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
細胞をマトリに埋め込んだ状態で培養しつつ、in vitroの抗がん剤assayができるのか。また移植したマウスでin vivoの抗がん剤assayができるのか検討してゆく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
抗がん剤assayの検討が不十分であり、実験を繰り返す試薬が必要があるため。また、作成した腫瘍細胞を移植する免疫不全マウスや、PDXを作成・維持するための免疫不全マウスが必要である。
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