| 研究課題/領域番号 |
17K16948
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
福永 一朗 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (20746581)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2020-03-31
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| キーワード | 遺伝性難聴 / iPS細胞 / GJB2 / Connexin26 |
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| 研究実績の概要 |
【背景】遺伝性難聴は、1600出生に1人と高頻度で発症し、聴覚と言語発育に著しい障害を引き起こすため、極めて高度なQOLの低下をもたらす。特に、コネキシン26(Connexin26, Cx26)をコードするGap junction beta 2 (GJB2)遺伝子は、世界最大の遺伝性難聴の原因遺伝子である。Cx26 は、Cx30 と共に内耳支持細胞群において細胞間イオン輸送を行うギャップ結合(Gap Junction, GJ)を構築する重要な要素である。これまで、細胞治療や薬剤スクリーニングを目的としてES/iPS細胞から内耳細胞への分化誘導法が複数報告されているが、いずれも有毛細胞を対象としたものであった。これに対し、GJB2 難聴を含めた遺伝性難聴の原因となる細胞は、有毛細胞だけでなく支持細胞や線維細胞など多岐にわたることから新しい治療戦略が求められている。しかし、申請者らが報告するまでES/iPS 細胞からCx26 を発現しギャップ結合プラークを構築する細胞への分化誘導法は報告されていなかった。
【目的】本課題では遺伝性難聴の根本的な治療法の開発を目指し、1)分化誘導した細胞の機能性評価、2)疾患モデル由来iPS 細胞からの分化誘導と遺伝子修復、3)難聴モデルマウスへの細胞移植を行う。
【結果】マウスES細胞を用いてSFEBｑ法におけるコネキシン26を高発現する条件を検討した。その結果、分化誘導因子およびシグナル阻害剤を組み合わせることでコネキシン26の発現が強化されることが明らかとなった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
マウスES細胞を用いて3次元培養（SFEBq法）時に観察される胚様体内のコネキシン26を発現する小胞が増強される培養条件を検討した。このコネキシン26を発現する小胞は2次元培養において観察されるコネキシン26ギャップ結合プラークを構築する細胞シートのオリジンであると考えられている。培養条件は、qPCRや免疫染色を用いて評価した。
本研究課題で得られた結果を論文にまとめて投稿した。現在は、投稿した論文のリバイス中であり、予定した期間よりも進捗が遅れていると判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在、3次元培養におけるコネキシン26の発現量の比較をウエスタンブロットにより評価している。コネキシン26に特異的なバンドが観察されていないため、実験条件の設定を行っている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額が生じた理由：現在投稿中の論文が査読者の指示により追加の実験が必要になったため。
使用計画：追加の実験に必要な消耗品の購入、具体的には、ニワトリの種卵、ウエスタンブロットに用いる試薬（ゲル、メンブレン、バッファー等）に充てる。
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