| 研究課題/領域番号 |
17K16968
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
原 進 大阪大学, 医学系研究科, 寄附講座助教 (00536956)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 角膜内皮 / 転写制御 / TFAP2B |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、角膜内皮細胞と転写因子TFAP2Bの関連性について、(1)TFAP2Bの下流の転写制御に関与する遺伝子群の網羅的解析および(2)TFAP2Bの転写活性化および抑制因子の探索を目的に研究を進めた。
(1) これまでの検討から、TFAP2Bは角膜内皮細胞表面マーカーZP4遺伝子などの転写活性化を担うことを明らかにした。さらにTFAP2Bの転写制御機構を明らかにするために、直接転写制御に関わる遺伝子群の網羅的解析をマイクロアレイを用いて実施した。具体的には初代培養したヒト培養角膜内皮細胞にsiRNAを用いてTFAP2Bを発現抑制し、複数の候補遺伝子の絞り込みを行った。さらに定量PCR法を用いて、TFAP2Bの標的遺伝子を数種類選定した。これらのTFAP2Bに制御される遺伝子群が角膜内皮細胞において、どのような生理機能を示すのか検討中である。
(2) TFAP2Bの転写活性化因子および抑制因子を決定するためには、まず、TFAP2Bの転写制御領域（転写開始点から上流約3k）をクローニングし、ルシフェラーゼアッセイ可能な安定発現株をヒト角膜内皮細胞株から作製し、各種サイトカインや低分子化合物ライブラリー等を用いてルシフェラーゼアッセイ法によって候補サイトカイン/化合物の選出を行った。さらに、これらの結果から、複数のサイトカインおよび低分子化合物群をヒト培養角膜内皮細胞を用いて定量PCRによって絞り込みを実施し、複数の因子がTFAP2Bの発現制御を担う可能性が示唆された。今後、これらの因子がどのような分子メカニズムで転写制御されるか検証する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の予定通り、TFAP2Bに対する網羅的な転写制御および発現制御の検討を行い、候補因子また候補遺伝子の選定が可能であった。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は予定通り、引き続き今年度選定した因子を用いてTFAP2Bの転写制御機構の解析を実施する。さらに、AAVベクターを用いた角膜内皮を含む組織培養系による解析、または、マウスを用いたTFAP2Bの発現抑制実験の方法を検討を実施する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度は、予定よりも低分子スクリーニング系の解析が順調にでき使用額が少なくなった。来年度、これらから絞り込んだ化合物の解析に必要な消耗品の購入費などに充てる予定である。
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