| 研究課題/領域番号 |
17K16995
|
|---|
| 研究機関 | 国立障害者リハビリテーションセンター(研究所) |
|---|
研究代表者 |
瀧田 真平 国立障害者リハビリテーションセンター(研究所), 研究所 感覚機能系障害研究部, 流動研究員 (90781261)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2019-03-31
|
| キーワード | eys / モデル動物 / ゼブラフィッシュ / 網膜色素変性 |
|---|
| 研究実績の概要 |
ヒトEYS遺伝子は日本人常染色体潜性網膜色素変性(arRP)の約3割を占める主要原因遺伝子であるが、根本的な治療法はなく喫緊の課題である。arRP治療法の確立には、EYS遺伝子の分子生理機能・RP発症メカニズムを明らかにすることが重要であり、本研究課題ではゼブラフィッシュの相同遺伝子eysのノックアウトゼブラフィッシュを作製し、これをモデル動物としてin vivoでEYSの機能解析を行い、RP発症メカニズムを解析する。2017年度の成果は次の通りである。
1. ゼブラフィッシュ受精卵にCRISPR/Cas9を微量注入出来るインジェクションシステムを立ち上げ、eys遺伝子ノックアウトゼブラフィッシュを作製した。
2. ゼブラフィッシュeysを成魚眼球から、ヒトEYSをY79細胞からクローニングし、ヒト皮膚繊維芽細胞HDF-aにEYS遺伝子の3'側が発現していることと、ヒトとゼブラフィッシュのどちらでも3'側にsplice variantsが存在することを明らかにした。
3. ゼブラフィッシュ視細胞においてゼブラフィッシュeysとヒトEYSを発現させるためのコンストラクトを作製した。
4. 先行研究で使用されていた抗ヒトEYS抗体を用いて野生型ゼブラフィッシュ成魚眼球に対して免疫組織染色を行い、視細胞connecting ciliumにシグナルが存在することを確認した。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
現在のところ概ね研究計画に記載した通りのスケジュールに沿って研究が進行しており、かつ、成果も得られているため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
おそらくEYS遺伝子のサイズが大きいために遺伝子改変ゼブラフィッシュの作製がチャレンジングな課題であることが判明したが、現在のところ概ね予定通り進行しているので、当面は当初の研究計画に沿って研究を推進する。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
ほぼ計画通りに執行しているが、当該年度中に発注した試薬や解析データの納品が次年度となるため、次年度の経費として計上する必要が生じたため。
|
