| 研究課題/領域番号 |
17K17251
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
坂上 泰士 広島大学, 病院(歯), 病院助教 (00735160)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 口腔癌 / 細胞接着因子 / インテグリン / CD133 |
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| 研究実績の概要 |
癌幹細胞は癌の発生・進展のみならず再発，転移および治療抵抗性にも深く関与しており， CD133 は癌幹細胞の有力なマーカーとして考えられている．本研究では，CD133陽性・陰性口腔癌細胞の細胞接着分子の発現・機能を明らかにし，口腔癌に対する新たな診断・治療標的を探索することを目的とする．本年度は，ヒト口腔扁平上皮癌由来細胞株を抗CD133抗体を用いてCD133陽性細胞を分離した．CD133蛋白の発現を免疫組織学的に検討し，本分離方法によりCD133陽性細胞が再現性よく分離され，さらにCD133陽性細胞の全細胞中に占める細胞数の比率はわずか約0.5%であることを明らかにした．無血清単層培養系では，CD133陽性細胞の増殖能は陰性細胞と比較し低下していた．一方，無血清浮遊培養系では，CD133陽性細胞はsphereを形成したが，CD133陰性細胞は形成できなかった．しかし培養開始時に，CD133陰性細胞にCD133陽性細胞を加えることでsphere形成能を獲得し，その大きさや数は、CD133陽性細胞の割合が0.5%でほぼプラトーに達した．さらに，一部の口腔扁平上皮癌細胞株はインテグリンαvβ8を高発現していた．そこで口腔癌由来CD133陽性・陰性細胞におけるインテグリンαvβ8の役割について明らかにするため，扁平上皮癌細胞株に，哺乳動物発現ベクターまたはインテグリンαv発現ベクターを導入することで，それぞれSCCmockまたはSCCαvを作成した．さらに，インテグリンβ8蛋白の一過性発現のために，テトラサイクリン（Tet）発現誘導システムを用いてSCCmock/β8TOまたはSCCαv/β8TOを分離した．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
sphere形成にはCD133陽性細胞が必要であり、CD133陽性細胞がCD133陰性細胞と凝集することでsphere形成が開始されることが明らかとなった．しかし，CD133陽性細胞が全細胞中に0.5％しか存在せず，in vivo研究における細胞の供給，選別に時間を要しており，今後手法の改善に取り組む必要がある．
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は，テトラサイクリン発現誘導システムを用いて一過性に，SCCmock/β8TOまたはSCCαv/β8TOのβ8蛋白を強制発現させ，それぞれの細胞におけるβ8蛋白発現の変化を経時的に解析する．また，インテグリンαvβ8発現が口腔癌細胞の増殖，遊走能，sphere形成能に与える影響を検討する．次にCD133陽性細胞とCD133陰性細胞を各々浮遊培養後，ヌードマウス背部皮下に移植し，in vivoにおける造腫瘍能を比較する．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
予定していた研究が当初の計画より遅れたため、実際の使用金額が使用予定金額を下回った。次年度の研究遂行のために必要な試薬、器具、消耗品の購入等に使用する予定である。
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