研究課題
未分化であり自己増殖能力を有した幹細胞は、さまざまな組織への分化能を有している。幹細胞の中でも、間葉系幹細胞（MSCs）は、各種幹細胞特異的マーカーによって他の細胞とは区別され、再生医療分野において多くの疾患に対する臨床応用が期待されている。歯髄幹細胞はその性質がMSCsに類似し、歯科疾患に対する再生医療やその他全身疾患で応用が期待されている。LEF-1は、生物の発生に重要なwnt/β-cateninシグナルにおける転写因子であり、β-cateninを介してwnt標的遺伝子の転写に関わることがわかっている。また、iPS細胞を含めた幹細胞における未分化の維持・増殖に関与することも報告されている。LEF-1は歯の発生の初期の段階で関わることから、歯髄幹細胞を含めた未分化な歯系細胞においてマーカーとなるのではと考え、本研究においてプロモーターとして採用することとした。これまでの研究では、乳歯歯髄細胞へpiggyBacトランスポゾンベクターを用いLEF-1プロモーターを配したプラスミド（pTA-LEN）の遺伝子導入実験を行ってきた。本研究では同様のプラスミド(pTA-LEN)をiPS細胞へ導入し、LEF-1陽性乳歯歯髄細胞由来iPS細胞の単離を目的としている。フィーダー細胞上にて培養した乳歯歯髄細胞由来iPS細胞へ遺伝子導入後、薬剤選択の段階でフィーダー細胞ごとiPS細胞が剥がれてしまい、多くのiPS細胞が死滅する現象が続いた。そこでフィーダーフリーでの培養に切り替え、遺伝子導入から薬剤選択を安定して行えるよう培養条件を変更することとした。しかし、これまでフィーダー上で培養していた乳歯歯髄細胞由来iPS細胞をフィーダーフリーでの培養に切り替えたが、未分化の維持を安定させることが困難であり、今後はiPS細胞の培養方法のさらなる検討を行う予定である。
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Sci Rep
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