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2018 年度 実施状況報告書

転写因子機能を有するMmp3により発現誘導される新規の癌転移マーカーの探索

研究課題

研究課題/領域番号 17K17895
研究機関岡山大学

研究代表者

奥舎 有加  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (50762027)

研究期間 (年度) 2017-04-01 – 2020-03-31
キーワード核内マトリックスメタロプロテアーゼ / PEXドメイン / 癌の浸潤・転移マーカー / 癌間質細胞 / 腫瘍微小環境 / エクソソーム / 細胞外小胞 / マイクロアレイ解析
研究実績の概要

本研究の目的は、転写因子機能を有するMMP3(マトリックスメタロプロテアーゼ3)により発現誘導される新規の癌転移マーカーの探索である。申請者らは独自の発想で、転移性の異なる3種類の細胞株を用いて網羅的遺伝子発現解析を行い,全MMP遺伝子ファミリーメンバーのmRNA発現レベルについて調べ、急速転移性細胞株LuM1においてMMP3 mRNAの発現が著しく高いことを明らかにした。さらに、LuM1が有する細胞増殖能・浸潤能・転移能をMMP3が促進していることをloss/gain of function解析両面から解明した。また、腫瘍におけるMMP3の細胞内局在を調べるために共焦点顕微鏡及び免疫組織化学法を用い、LuM1皮下移植により形成された腫瘍辺縁及び間質における核内MMP3の発現を明らかにした。さらに、MMP3のタンパク質ドメインのうち、プロテアーゼ活性を持たないPEXドメインの核内局在と強制発現系における細胞増殖能・遊走能の上昇について世界で初めて明らかにした。すなわち、がん細胞の増殖,浸潤,転移における、核内MMP3およびそのPEXドメインの新機能を明らかにした(Okusha Y, et al, J Cell Biochem. 2018)。この成果に加え、近年、癌周囲組織および遠隔臓器へ様々な影響を及ぼすことが報告されている細胞外小胞(Extracellular Vesicle, EV)についても検討し、LuM1のEV中には、高濃度のMMP3が含有されていることを明らかにした。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

H30年度は、転移性の異なる大腸がん細胞株Colon26 / LuM1 / NM11モデルにおいて、MMP3のloss/gain of function両面から解析を行い、がん細胞の増殖,浸潤と転移における核内MMP3およびそのPEXドメインの新機能を報告できたため、本研究は当初の予定通りに遂行できていると言える。本年度の実験計画としては、①CRISPR/Cas9を用いたゲノム編集によるMMP3ノックアウト細胞株の樹立およびそれに伴う遺伝子群の発現変動解析、②MMP3の下流で制御を受ける遺伝子についてのloss/gain of function解析、③MMP3の細胞内移行機構の解明を予定している。現在までにMMP3ノックアウト細胞株の樹立を行い、MMP3の下流で制御される遺伝子について解析を進めている。また、LuM1のEVおよび培養上清可溶画分中にはColon26と比較して高濃度のMMP3が含有されていることから、MMP3の核内移行機構を明らかにするために、MMP3陽性EVおよびMMP3含有培養上清をMMP3遺伝子欠失細胞に添加し、標識したEVの細胞内局在およびMMP3の核内移行機構を共焦点レーザー顕微鏡およびアレイスキャンにて解析を行う予定である。

今後の研究の推進方策

今後の研究は、癌転移性におけるMMP3の役割を明らかにし、MMP3により発現誘導される新規の癌転移マーカーを探索するものである。
具体的には、1) MMP3のloss/gain of functionにより、MMP3により制御される遺伝子を確定する。2) MMP3により発現誘導される遺伝子のプロモーター領域を組み込んだ蛍光レポーターコンストラクトを遺伝子導入し、クローニングにより安定株を樹立する。同安定株を用いて、in vitro 浸潤能ならびにin vivo 転移能の解析を行う。3) ヒト頭頸部癌において他の癌種と比較してMMP3高発現が認められることから、ヒト頭頸部癌細胞株パネル (Kozaki K, et al, Cancer Res, 2008) を用いて、MMP3により発現誘導される遺伝子の発現レベルと癌悪性度との相関性を明らかにする。4) MMP3陽性EVの細胞内取り込み機構および細胞内局在を明らかにする。

次年度使用額が生じた理由

次年度は論文投稿を控えているため、論文投稿料、印刷代を考慮している。

  • 研究成果

    (21件)

すべて 2019 2018

すべて 雑誌論文 (5件) (うち国際共著 2件、 査読あり 5件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (16件) (うち国際学会 3件)

  • [雑誌論文] A reporter system evaluates tumorigenesis, metastasis, β-catenin/MMP regulation, and druggability.2019

    • 著者名/発表者名
      Sogawa C, Eguchi T, Okusha Y, Ono K, Ohyama K, Iizuka M, Kawasaki R, Hamada Y, Takigawa M, Sogawa N, Okamoto K, Kozaki KI.
    • 雑誌名

      Tissue Eng Part A.

      巻: 348 ページ: 1

    • DOI

      0.1089/ten.TEA.2018.0348.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] The intranuclear PEX domain of MMP involves proliferation, migration, and metastasis of aggressive adenocarcinoma cells.2018

    • 著者名/発表者名
      Okusha Y, Eguchi T, Sogawa C, Okui T, Nakano K, Okamoto K, Kozaki KI.
    • 雑誌名

      J Cell Biochem.

      巻: 119 ページ: 7363~7576

    • DOI

      10.1002/jcb.27040

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Depletion of Lipid Efflux Pump ABCG1 Triggers the Intracellular Accumulation of Extracellular Vesicles and Reduces Aggregation and Tumorigenesis of Metastatic Cancer Cells.2018

    • 著者名/発表者名
      Namba Y, Sogawa C, Okusha Y, Kawai H, Itagaki M, Ono K, Murakami J, Aoyama E, Ohyama K, Asaumi JI, Takigawa M, Okamoto K, Calderwood SK, Kozaki KI, Eguchi T.
    • 雑誌名

      Front Oncol.

      巻: 8 ページ: -

    • DOI

      10.3389/fonc.2018.00376

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Organoids with cancer stem cell-like properties secrete exosomes and HSP90 in a 3D nanoenvironment.2018

    • 著者名/発表者名
      Eguchi T, Sogawa C, Okusha Y, Uchibe K, Iinuma R, Ono K, Nakano K, Murakami J, Itoh M, Arai K, Fujiwara T, Namba Y, Murata Y, Ohyama K, Shimomura M, Okamura H, Takigawa M, Nakatsura T, Kozaki KI, Okamoto K, Calderwood SK.
    • 雑誌名

      PLoS One.

      巻: 13 ページ: -

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0191109

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Lactate Transporter Monocarboxylate Transporter 4 Induces Bone Pain in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma.2018

    • 著者名/発表者名
      Hasegawa K, Okui T, Shimo T, Ibaragi S, Kawai H, Ryumon S, Kishimoto K, Okusha Y, Monsur Hassan NM, Sasaki A.
    • 雑誌名

      Int J Mol Sci.

      巻: 19 ページ: -

    • DOI

      10.3390/ijms19113317

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] Drug repositioning using three-dimensional, MMP9 promoter activity-based anticancer drug screening (MMP9プロモーター活性を指標とした三次元培養システムを用 いた抗がん剤スクリーニングによる薬剤再開発)2019

    • 著者名/発表者名
      Sogawa C, Eguchi T, Okusha Y, Ohyama K, Ono K, Sogawa N, Okamoto K
    • 学会等名
      第92回日本薬理学会年会
  • [学会発表] Depletion of cholesterol lipid efflux pump ABCG1 triggers accumulation of exosomes and regression of tumors (コレステロール排出ポンプABCG1標的による腫瘍 内エクソソーム蓄積および腫瘍縮小)2019

    • 著者名/発表者名
      Eguchi T, Sogawa C, Namba Y, Okusha Y et al.
    • 学会等名
      第92回日本薬理学会年会
  • [学会発表] Matrix metalloproteinase 3 (MMP3) regulates expression of Hsp gene in high-metastatic cell line of colon cancer.2018

    • 著者名/発表者名
      Okusha Y, Eguchi T, Sogawa C, Okamoto K, and Kozaki K.
    • 学会等名
      18th World congress of basic and clinical pharmacology
    • 国際学会
  • [学会発表] Establishment of high metastatic evolved clone of adenocarcinoma cells with Mmp9 promoter-driven fluorescence reporter.2018

    • 著者名/発表者名
      Sogawa C, Eguchi T, Okusha Y, Nakano K, Namba Y, Ohyama K, Sogawa N, Okamoto K, and Kozaki K
    • 学会等名
      18th World congress of basic and clinical pharmacology
    • 国際学会
  • [学会発表] Secretion of Extracellular Vesicles with Heat Shock Proteins by Resistant Adenocarcinomas and Metastatic Oral Cancer2018

    • 著者名/発表者名
      Eguchi T, Ono K, Sogawa C, Okusha Y, et al.
    • 学会等名
      Cold Spring Harbor Asia meeting for Biology of Extracellular Vesicles
    • 国際学会
  • [学会発表] 転移性癌細胞株におけるPEX/MMP3の役割2018

    • 著者名/発表者名
      奥舎有加, 江口傑徳, 十川千春, 奥井達雄, 中野敬介, 岡元邦彰
    • 学会等名
      第10回日本CCNファミリー研究会
  • [学会発表] 核内及びエクソソーム中に存在するMMPs/PEXの癌進展における役割とその制御2018

    • 著者名/発表者名
      奥舎有加, 江口傑徳, 十川千春, 小野喜章, 奥井達雄,中野敬介, 岡元邦彰
    • 学会等名
      第60回日本歯科基礎医学会
  • [学会発表] 破骨細胞分化を負に制御するRabタンパクの同定2018

    • 著者名/発表者名
      奥舎有加,板垣まみ,十川千春,江口傑徳,岡元邦彰
    • 学会等名
      第60回日本歯科基礎医学会
  • [学会発表] 口腔扁平上皮癌診断・治療における分子シャペロンHSP90含有細胞外小胞の可能性2018

    • 著者名/発表者名
      小野喜章, 江口傑徳, 十川千春, 奥舎有加, 河合穂高, 中野敬介, 佐々木朗, 岡元邦彰, 小崎健一
    • 学会等名
      第60回日本歯科基礎医学会(モリタ優秀発表賞受賞)
  • [学会発表] 急速転移性癌細胞株由来細胞外小胞による破骨細胞分化および癌細胞浸潤の制御2018

    • 著者名/発表者名
      板垣まみ,十川千春,奥舎有加,江口傑徳,小野喜章,岡元邦彰
    • 学会等名
      第60回日本歯科基礎医学会
  • [学会発表] 癌の治療抵抗性と転移におけるHSP90およびMMP3の役割2018

    • 著者名/発表者名
      江口傑徳,小野喜章,奥舎有加,十川千春,内部健太,中野敬介,河合穂高,奥井達雄,岡元邦彰,スチュアート・カルダーウッド
    • 学会等名
      第60回日本歯科基礎医学会
  • [学会発表] Tumoroid Never Knows? 腫瘍オルガノイドと細胞外小胞からみる難治性がん研究・治療のミライ2018

    • 著者名/発表者名
      江口傑徳,小野喜章,奥舎有加,藤原敏史,十川千春,Stuart K Calderwood
    • 学会等名
      第41回日本分子生物学会年会
  • [学会発表] 大腸癌の増殖,浸潤,転移を促進するPEXドメインの発見とその抑制2018

    • 著者名/発表者名
      江口傑徳,奥舎有加,小野喜章,十川千春,岡元邦彰,カルダーウッド スチュアート,小崎 健一
    • 学会等名
      第77回日本癌学会学術総会
  • [学会発表] 破骨細胞分化を制御する新規Rabタンパク質の同定と機能解析2018

    • 著者名/発表者名
      奥舎有加,板垣まみ,十川千春,江口傑徳,岡元邦彰
    • 学会等名
      第39回 岡山歯学会総会・学術集会
  • [学会発表] 転移性の異なる細胞株を用いた核内MMP3の機能解析とその役割2018

    • 著者名/発表者名
      奥舎有加, 江口傑徳, 十川千春, 奥井達雄, 中野敬介, 小崎健一, 岡元邦彰
    • 学会等名
      第133回日本薬理学会近畿部会
  • [学会発表] がん幹細胞特性をもつオルガノイドによるEPCAMエクソソームおよびHSP90の分泌2018

    • 著者名/発表者名
      十川千春,江口傑徳,小野喜章,奥舎有加,他
    • 学会等名
      第77回日本癌学会学術総会

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公開日: 2019-12-27  

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