| 研究課題/領域番号 |
17K18135
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
茂泉 佐和子 (吉名佐和子) 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (00424672)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | ADAMTS9 / C.elegans / IP3R |
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| 研究実績の概要 |
これまでADAMTS9は細胞外だけではなく、ER内で機能し、ADAMTS9の発現抑制により、ER-Golgi間の蛋白質輸送が阻害されること、この機能はC末端にあるGONドメインが重要であることを見いだした(2012. 発表済み)。細胞内におけるADAMTS9/GON-1の作用点を解明するため、KillerRedを融合したGONドメインをHEK293細胞のゲノムに単コピーで挿入し、緑色光を照射し、GONドメインが失活した直後に起こる細胞の変化を検討した。その結果、GONドメインが失活した直後に、細胞質のカルシウムイオン濃度が上昇することを明らかにした。さらに、インバースタイプのカルシウムセンサーであるIP2.0を用い、そのカルシウムイオンはERから出てきた可能性が高いことを見いだした。
GONドメインがERのカルシウム恒常性維持に関与している可能性が示唆されたことから、IP3Rとの関係を検討した。免疫沈降法を用い実験を行った結果、GONドメインはIP3Rとは結合しなかったが、IP3Rのユビキチン化に関与する分子と結合した。そこで、ADAMTS9の有無によりIP3Rのユビキチン化が変化するか否かを検討した。
またC.elegansを用い、ITR-1（IP3Rの線虫ホモログ）のユビキチン化サイトを置換した変異体を作成した。このitr-1変異体は、gon-1（ADAMTS9の線虫ホモログ）の表現型を一部抑圧することを見いだした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究計画に示した通り、ADAMTS9/GON-1と相互作用する分子を見つけ、そのタンパク質の機能から既知のメカニズムとの関連を見いだしたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
GWASにより、ADAMTS9 は 糖尿病、加齢黄斑変性、高血圧、動脈瘤、などのリスク遺伝子であることが報告されている。そこで、ADAMTS9/GON-1の細胞内機能と疾患発症との関連を解析する。血管平滑筋などの培養細胞を用い、コラーゲンベース細胞収縮アッセイ等を行うことにより、ADAMTS9の機能阻害により、疾患に関連する表現型が見られるか否かを検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞培養と免疫沈降などがスムーズに行えたため、使用した消耗品が少なかった。
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