| 研究課題/領域番号 |
17K19325
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
音井 威重 徳島大学, 大学院社会産業理工学研究部(生物資源産業学域), 教授 (30311814)
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| 研究分担者 |
竹本 龍也 徳島大学, 先端酵素学研究所(オープンイノベ), 教授 (30443899)
谷原 史倫 徳島大学, 大学院社会産業理工学研究部(生物資源産業学域), 特任助教 (90754680)
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| 研究期間 (年度) |
2017-06-30 – 2019-03-31
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| キーワード | 内在性レトロウイルス / ゲノム編集 / ブタ / 異種移植 / CRISPR/Cas９ |
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| 研究実績の概要 |
ブタは生理学的および解剖学的にヒトに比較的近いことから、移植用代替臓器の提供動物として期待されている。しかし、全てのブタは内在性レトロウイルス（PERV）をゲノム中に保有しており、移植後にヒトへの感染が懸念されることから異種移植の障壁となってきた。そこで本研究は、申請者らが開発したゲノム編集（CRISPR/Cas9）による新規手法（GEEP法）を用い、受精卵の段階でPERVの複製に関与する重要遺伝子（pol）をノックアウトすることにより、ヒトへの感染能力をなくした安全なブタを作出することを目的とした。実際には、GEEP法を用い1細胞期(体外受精胚)の段階でゲノム編集によりpol遺伝子をノックアウトし、作出したゲノム編集胚を用いゲノム編集に用いるｇRNAの効果を明らかにした。これまでに、5種類のgRNAを用いGEEP法によりゲノム編集後の胚発生率、pol遺伝子の変異導入率を指標に検討した結果、胚発生率とpol遺伝子の変異導入率とに負の相関性が認められ、変異導入率および変異効率の両率とも高いと胚発生率が低下することを明らかにした。本年度は、胚発生率と変異導入率の良好な3種類のgRNAを用い、それぞれ2種類の組み合わせによるダブルノックアウトを試みた。その結果、ｇRNA単体でも胚発生率を低下する群は、組み合わせにおいても同様に胚発生率を低下させたが、変異導入率において相関性がなかったことから、より多くのpol遺伝子をノックアウトするには、ｇRNAの組み合わせが重要であることが示唆された。
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