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2018 年度 実績報告書

蛍光性非天然アミノリン脂質合成酵素の創出

研究課題

研究課題/領域番号 17K19338
研究機関山形大学

研究代表者

田村 康  山形大学, 理学部, 准教授 (50631876)

研究期間 (年度) 2017-06-30 – 2019-03-31
キーワードリン脂質
研究実績の概要

本研究の目的は,大腸菌ホスファチジルセリン(PS)合成酵素PssAを改変し,蛍光ラベルセリンを基質として認識することができる人工酵素を開発することで,細胞内で蛍光PSを合成できる細胞を創出することである。ランダム変異導入したPssAを発現する大腸菌ライブラリーを作製し,スクリーニング実験を行ったが,蛍光性非天然アミノ酸を認識する酵素の選別が難しく,目的の人工酵素を単離することはできなかった。
一方,出芽酵母細胞のPS合成酵素の代わりに,出芽酵母細胞の様々なオルガネラ膜にPssAを発現する変異細胞を作製し,その増殖,リン脂質組成,PS合成活性などを調べたところ,興味深いことに本来のPSの合成の場である小胞体以外のオルガネラ,具体的には脂肪滴,ペルオキシソーム,ミトコンドリア内膜でPSを合成しても細胞の増殖に充分量のPSを合成できることを明らかにした。また様々な細胞内区画で合成されたPSが効率よくミトコンドリア内膜の酵素によってPEに変換されることから,脂肪滴,ペルオキシソーム,ミトコンドリア内膜間で効率よくリン脂質の輸送反応が起きていることがわかった。これらの結果は,細胞内リン脂質の輸送経路を明らかにする上で重要な発見であり,現在論文にまとめているところである。
蛍光PSを合成できる改変PssAを合成するためには,遺伝学するクリーニングを用いる方保は難しかったため,PssAの立体構造を明らかにし,基質との結合部位を決定することにした。これまでにPssAを大腸菌から大量発現,精製し,結晶化できる条件まで決定することができた。今後,基質との共結晶の作成を進め,X線構造解析により構造決定を行う予定である。

  • 研究成果

    (26件)

すべて 2019 2018

すべて 雑誌論文 (8件) (うち国際共著 3件、 査読あり 5件、 オープンアクセス 3件) 学会発表 (17件) (うち国際学会 2件、 招待講演 7件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] Maintenance of Cardiolipin and Crista Structure Requires Cooperative Functions of Mitochondrial Dynamics and Phospholipid Transport2019

    • 著者名/発表者名
      Kojima Rieko、Kakimoto Yuriko、Furuta Shiina、Itoh Kie、Sesaki Hiromi、Endo Toshiya、Tamura Yasushi
    • 雑誌名

      Cell Reports

      巻: 26 ページ: 518~528.e6

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2018.12.070

    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Myristoyl group-aided protein import into the mitochondrial intermembrane space2019

    • 著者名/発表者名
      Ueda Eri、Tamura Yasushi、Sakaue Haruka、Kawano Shin、Kakuta Chika、Matsumoto Shunsuke、Endo Toshiya
    • 雑誌名

      Scientific Reports

      巻: 9 ページ: 1185

    • DOI

      10.1038/s41598-018-38016-1

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] CdsA is involved in biosynthesis of glycolipid MPIase essential for membrane protein integration in vivo2019

    • 著者名/発表者名
      Sawasato Katsuhiro、Sato Ryo、Nishikawa Hanako、Iimura Naoki、Kamemoto Yuki、Fujikawa Kohki、Yamaguchi Toshiyuki、Kuruma Yutetsu、Tamura Yasushi、Endo Toshiya、Ueda Takuya、Shimamoto Keiko、Nishiyama Ken-ichi
    • 雑誌名

      Scientific Reports

      巻: 9 ページ: 1372

    • DOI

      10.1038/s41598-018-37809-8

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Porin Associates with Tom22 to Regulate the Mitochondrial Protein Gate Assembly2019

    • 著者名/発表者名
      Sakaue Haruka、Shiota Takuya、Ishizaka Naoya、Kawano Shin、Tamura Yasushi、Tan Kher Shing、Imai Kenichiro、Motono Chie、Hirokawa Takatsugu、Taki Kentaro、Miyata Non、Kuge Osamu、Lithgow Trevor、Endo Toshiya
    • 雑誌名

      Molecular Cell

      巻: 73 ページ: 1044~1055.e8

    • DOI

      10.1016/j.molcel.2019.01.003

    • 査読あり / 国際共著
  • [雑誌論文] Advanced In Vitro Assay System to Measure Phosphatidylserine and Phosphatidylethanolamine Transport at ER/Mitochondria Interface2019

    • 著者名/発表者名
      Tamura Yasushi、Kojima Rieko、Endo Toshiya
    • 雑誌名

      Methods in Molecular Biology

      巻: 1949 ページ: 57~67

    • DOI

      10.1007/978-1-4939-9136-5_6

  • [雑誌論文] Discovery and Optimization of Inhibitors of the Parkinson’s Disease Associated Protein DJ-12018

    • 著者名/発表者名
      Tashiro Shinya、Caaveiro Jose M. M.、Nakakido Makoto、Tanabe Aki、Nagatoishi Satoru、Tamura Yasushi、Matsuda Noriyuki、Liu Dali、Hoang Quyen Q.、Tsumoto Kouhei
    • 雑誌名

      ACS Chemical Biology

      巻: 13 ページ: 2783~2793

    • DOI

      10.1021/acschembio.8b00701

    • 査読あり / 国際共著
  • [雑誌論文] Organelle contact zones as sites for lipid transfer2018

    • 著者名/発表者名
      Tamura Yasushi、Kawano Shin、Endo Toshiya
    • 雑誌名

      The Journal of Biochemistry

      巻: 165 ページ: 115~123

    • DOI

      10.1093/jb/mvy088

  • [雑誌論文] 特集 細胞高次機能をつかさどるオルガネラコミュニケーション Ⅲ.ミトコンドリア ミトコンドリアと小胞体間のオルガネラコンタクト2018

    • 著者名/発表者名
      田村 康、河野 慎、遠藤 斗志也
    • 雑誌名

      生体の科学

      巻: 69 ページ: 577~580

    • DOI

      10.11477/mf.2425200926

  • [学会発表] 脂質輸送におけるオルガネラ間コンタクトサイトの役割2019

    • 著者名/発表者名
      田村 康
    • 学会等名
      第21回植物オルガネラワークショップ
    • 招待講演
  • [学会発表] Visualizing multiple inter-organelle contact sites using the organelle-targeted split-GFP probes2018

    • 著者名/発表者名
      Yasushi Tamura
    • 学会等名
      1st International Mitochondrial Meeting for Young Scientists
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] ミトコンドリア・小胞体コンタクトサイトの数を制御するメカニズム2018

    • 著者名/発表者名
      田村 康
    • 学会等名
      生理学研究所研究会 オルガネラ膜ナノドメインの機能と動態
    • 招待講演
  • [学会発表] Split-GFPを用いた オルガネラコンタクトサイトの可視化と解析2018

    • 著者名/発表者名
      田村 康
    • 学会等名
      第27回 日本バイオイメージング学会学術集会
    • 招待講演
  • [学会発表] ミトコンドリア・小胞体コンタクトサイトの数を制御するメカニズム2018

    • 著者名/発表者名
      田村 康
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
    • 招待講演
  • [学会発表] Maintenance of Cardiolipin and Crista Structure Requires Cooperative Functions of Mitochondrial Dynamics and Phospholipid Transport2018

    • 著者名/発表者名
      Yasushi Tamura
    • 学会等名
      Osakamito2018
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] ミトコンドリア・小胞体間コンタクトサイトの数を制御するメカニズム2018

    • 著者名/発表者名
      田村 康
    • 学会等名
      第18回日本ミトコンドリア学会年会
    • 招待講演
  • [学会発表] Visualizing multiple inter-organelle contact sites using split-GFP system2018

    • 著者名/発表者名
      Yuriko Kakimoto, Shinya Tashiro, Rieko Kojima, Toshiya Endo, Yasushi Tamura
    • 学会等名
      2018 Cell and Developmental Biology Meeting(細胞生物学会)
  • [学会発表] ミトコンドリア型CDP-DAG合成酵素Tam41の結晶化2018

    • 著者名/発表者名
      木村啓介, 小島理恵子, 遠藤斗志也, 田村康
    • 学会等名
      第18回日本蛋白質科学会年会
  • [学会発表] 遺伝学的スクリーニングに向けた哺乳類細胞内ミトコンドリア-ER膜間コンタクト検出系の構築2018

    • 著者名/発表者名
      田代 晋也, 遠藤 斗志也, 田村 康
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
  • [学会発表] ミトコンドリア型CDP-DAG合成酵素Tam41の結晶化2018

    • 著者名/発表者名
      木村 啓介, 小島 理恵子, 遠藤 斗志也, 田村 康
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
  • [学会発表] Split-GFPを用いた新規オルガネラ間近接評価実験系の確立2018

    • 著者名/発表者名
      柿元 百合子, 田代 晋也, 小島 理恵子, 遠藤 斗志也, 田村 康
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
  • [学会発表] ミトコンドリアポリンタンパク質Por1による外膜透過装置TOM複合体のアセンブリー制御2018

    • 著者名/発表者名
      阪上 春花, 塩田 拓也, 石坂 直也, 田村 康, 遠藤 斗志也
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
  • [学会発表] リン脂質代謝におけるPah1の機能解析2018

    • 著者名/発表者名
      工藤 真之祐, 古田 詩唯奈, 遠藤 斗志也, 田村 康
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
  • [学会発表] Split-GFPを用いたNVJ連携ゾーンの機能の解析2018

    • 著者名/発表者名
      新名 真夏, 柿元 百合子, 遠藤 斗志也, 田村 康
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
  • [学会発表] 新規オルガネラ間結合因子の同定と生理機能の解析2018

    • 著者名/発表者名
      柿元 百合子,小島 理恵子, 新名 真夏,遠藤 斗志也, 田村 康
    • 学会等名
      第13回小胞体ストレス研究会
  • [学会発表] Two AAA-ATPases-mediated degradation pathways of mislocalized tail-anchored proteins on the outer mitochondrial membrane2018

    • 著者名/発表者名
      Shunsuke Matsumoto1, Chika Kakuta1, Kunio Nakatsukasa2, Yasushi Tamura3, Masatoshi Esaki, Toshiya Endo
    • 学会等名
      分子生物学会
  • [図書] トコンドリアと小胞体のクロストーク,月刊「細胞」2018年 7月号 オルガネラのバイオロジー 最前線 The leading edge of organelle biology2018

    • 著者名/発表者名
      田村康,河野慎,遠藤斗志也
    • 総ページ数
      4
    • 出版者
      北隆館
    • ISBN
      04127-07

URL: 

公開日: 2019-12-27  

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