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がんは遺伝子異常の疾患であり、次世代シーケンサーの技術の発展による網羅的なゲノム解析の結果から多くのがん遺伝子ならびにがん抑制遺伝子の変異などが組織ごとに同定された。それらは発がんの重要な機序として注目されている。遺伝子変異の機能解析の研究は様々な観点から取り組まれ、細胞株などを用いた研究で有用な報告も見られるが、同定されたがんの遺伝子変異が、実際はどの程度、どのように発がんや転移能の獲得に寄与しているかは不明な点が多く、正常細胞に対してCRISPR-Cas9を用いた遺伝子変異を多段階的に導入することによるがん化の過程の網羅的探索は見受けられない。本研究では、正常の細胞から発がんを誘導することで、ドライバー変異の機能評価をする。CRISPR-Cas9を用い、正常細胞に対して複数の多段階的な遺伝子変異を導入し、実際の病態に近い発がんモデルを作製し、発がん過程に関与する遺伝子変異の寄与率の定量的な解析を行った。CRISPR-Cas9により、遺伝子を欠損させる候補を選択し、それらに対するsgRNAとCas9を発現するシステムを構築し、細胞に導入した後に、細胞のクローン化を行い、目的の遺伝子欠損細胞株の作製を行った。次の段階として、免疫不全動物に、遺伝子編集により発がんした正常細胞を移植した動物モデルを作製し、薬剤の効果などを検証する。この研究から、ゲノムの異常を正常細胞において正確に反映し、再現することが可能となり、ドライバー遺伝子の腫瘍形成過程における実際の機能の検証を実現する。
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