| 研究課題/領域番号 |
17K19761
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
常松 貴明 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学系), 助教 (70726752)
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| 研究分担者 |
工藤 保誠 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(歯学系), 准教授 (50314753)
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| 研究期間 (年度) |
2017-06-30 – 2019-03-31
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| キーワード | 口腔扁平上皮癌 / 浸潤 / 転移 |
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| 研究実績の概要 |
口腔領域の最も主要な悪性腫瘍である口腔扁平上皮癌の予後を規定する最も重要な因子は転移である。しかし、 未だ有効な分子標的治療は開発されておらず、他臓器の癌と比較し、研究が遅れているのが現状である。その理由として1)培養細胞主体のin vitroの実験が多い、2)遺伝子発現量の差の大きいものに着目した研究が多い、3) 適切なマウスモデルがないなどの点が考えられる。本研究では、これらの点を踏まえ、高転移同種同所移植口腔 扁平上皮癌マウスモデルの創出にチャレンジする。具体的には、転移能のないマウス口腔扁平上皮癌細胞株をsh RNA libraryにより形質転換させ、転移巣より細胞を分離し、形質転換により高い転移能を獲得した細胞を濃縮し、shRNAの標的遺伝子を同定する。さらにノックアウト細胞を樹立し、その同種同所移植をマウスモデルとして樹立し、転移の病態解明や新規治療薬開発有用なツールの確立を目指すことを目的としている。
本年度は当初の研究計画に基づいて、蛍光タンパク質を安定性に発現するマウス頭頸部扁平上皮癌細胞株の作製を行った。
レンチウイルスベクター(pCSII-CMV-Venus)を用いて、C57BL/6マウス由来口腔扁平上皮癌細胞株であるHNM007細胞(Oncogene.2004)に蛍光タンパク質Venus cDNAを導入し、安定に発現する細胞株を作成した。この細胞株にセルソーターを用いて、Venus発現細胞を濃縮・濃縮し、蛍光タンパクを発現するC57BL/6マウス由来口腔扁平上皮癌細胞株を樹立した。その後、C57BL/6マウスの舌に移植し、造腫瘍性が保たれていることを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は蛍光タンパク質を安定性に発現するマウス頭頸部扁平上皮癌細胞株を作成し、その腫瘍形成能を確認したが、レンチウイルスを使用したshRNA libraryによるスクリーニングの実施には至らなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度作製した蛍光タンパク質を安定性に発現するマウス頭頸部扁平上皮癌細胞株をレンチウイルスを使用したshRNA libraryにて形質転換後、C57BL/6マウスの舌に移植し、高転移癌細胞株の濃縮・分離を行う予定である。そして、これらの細胞からDNAを抽出し、転移を促進したshRNAの標的遺伝子を同定する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度は蛍光タンパク質を安定的に発現するマウス頭頸部癌細胞株を作成することはできたが、shRNA libraryを用いたスクリーニングの実施には至らなかったため、来年度、shRNA libraryを用いたスクリーニングを行う予定であるため、その解析費用として予定している。
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