| 研究実績の概要 |
申請書提案通り、転写抑制因子CtBP2のエピゲノムに対する効果を検証した。これまで代謝制御性の指摘されてこなかったCtBP2が主に肝臓で糖・脂質代謝に関係することを明らかにしており（投稿準備中）、それを受けて他の組織での役割も解析し始めている。当初申請時点ではCtBP2のエピゲノムにおける役割を肝臓を中心に進める予定であったが、肝臓特異的CtBP2欠損マウスの樹立が予定通り進まなかったこともあり、当該年度中には膵臓β細胞でのCtBP2がエピゲノムに与える役割を検証した。
膵β細胞株MIN6細胞を使ってCtBP2のノックダウン、過剰発現を行うとCtBP2によってインスリン遺伝子は正の制御を受けることが申請前の研究で明らかになっていた。このシステムでインスリンプロモーターのエピゲノム修飾をChIP-qPCRで確認すべく条件検討を行い解析した。
H3K4me2, H3K4me3, H3K4ac, H3K9me, H3K9ac, H3K27me, H3K27acとそれぞれCtBP2の過剰発現、ノックダウンで検証する中でとりわけH3K4me2, H3K4me3が強くCtBP2に制御されており、いわゆるopen chromatin構造を誘導するH3K4meがCtBP2によって誘導されることが明らかになった。H3K27acもCtBP2によって誘導され、open chromatin構造を取ることはH3K27によっても補助的に機能していることが明らかになった。H3K27meはCtBP2と逆相関で、全体にCtBP2はこうしたエピゲノム修飾でインスリン遺伝子のプロモーターをopen chromatinにしていた。
こうした機能を説明する候補分子の検索も行っており、いくつかの候補遺伝子を見い出すこともできた。
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