質量分析計によるトキソプラズマ症の再活性化検出法及び重症度の評価法の確立

2017 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 17KT0124
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 野呂瀬 一美 千葉大学, 大学院医学研究院, 准教授 (30156244)
• 研究分担者: 彦坂 健児 千葉大学, 大学院医学研究院, 特任講師 (30456933) ; 佐藤 守 千葉大学, 医学部附属病院, 特任准教授 (20401002) ; 野村 文夫 千葉大学, 医学部附属病院, 特任教授 (80164739)
• 研究期間 (年度): 2017-07-18 – 2020-03-31
• キーワード: トキソプラズマ / ステージ変換 / シスト

研究実績の概要

トキソプラズマの人体内における発育ステージとしては急増虫体のタキゾイトとシストを形成する緩増虫体のブラディゾイトがある。それらは病原性や再発に密接に関係しているため虫体の発育分化に影響を与える因子や機構を理解することは非常に重要である。今回、我々は、in vitroにおけるタキゾイトからのシスト形成と、シスト（ブラディゾイト）からタキゾイトへの活性化について、関与する因子を検討するために、インターフェロンガンマノックアウト（GKO）マウスの胎児繊維芽細胞を用いたトキソプラズマ感染実験を行い、培養条件を様々に変化させてステージの動向を観察した。
まず、GKOマウスの胎児皮膚より繊維芽細胞を得、細胞培養プレートで培養し、プレート全面に細胞が生着・増殖するのを確認後、次の２つの実験を行った。
①シスト形成能を有するトキソプラズマの深谷株をGKOマウスに感染させ、その腸管リンパ節から得たタキゾイトをGKOマウス胎児繊維芽細胞に感染させたところ、約一か月でシストを形成した。特に培養液のPHを酸性にした場合にシスト形成能が早い傾向がみられた。
②野生型マウスに感染させて得た深谷株の脳内シスト（ブラディゾイト）を比重遠心法で得、GKOマウス胎児繊維芽細胞に感染させたところ、約２週間でタキゾイトが繊維芽細胞から遊出してきた。さらに培養液のPHを酸性にすると再度シストを形成した。
これらの結果より、トキソプラズマをin vitroでステージ変化させる条件・環境が明らかになり、次年度には培養液中のタンパク質の変化を解析できる素地が整った。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

GKOマウスの維持に問題があり、マウス数が足りず、胎児繊維芽細胞の培養が遅れたため。

今後の研究の推進方策

GKOマウスの維持を確実にするために野生型マウスと交配させF1マウスを得、それらをさらに交配させ、遺伝子チェックを行い、再度GKOマウスを樹立させる。
GKOマウス胎児繊維芽細胞を確実かつ十分に確保できれば、in vitroの感染実験がさらに条件を変化させて施行でき、stage変化に伴うタンパク質を質量分析法を用いたプロテオーム解析により、同定できる。

研究成果

• [雑誌論文] Rosai-Dorfman disease and uveitis. (2018)
  • 著者名/発表者名: Nakajima N, Fukumoto T, Kozaru T, Sakaguchi M, Norose K, Oka M.
  • 雑誌名: Eur J Dermatol. 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1684/ejd.2017.3075.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cerebral toxoplasmosis diagnosed by nested-polymerase chain reaction in a patient with rheumatoid arthritis. (2018)
  • 著者名/発表者名: Matsuura J, Fujii A, Mizuta I, Norose K, Mizuno T.
  • 雑誌名: Intern Med. 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.2169/internalmedicine.0139-17.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] An improved in-house lysis-filtration protocol for bacterial identification from positive blood culture bottles with high identification rates by MALDI-TOF MS. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Murata S, Miyabe A, Satoh M, Takiwaki M, Matsushita K, Nomura F.
  • 雑誌名: J Microbiol Methods. 巻: 148 ページ: 40-45
  • DOI: 10.1016/j.mimet.2018.03.014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Assessment by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry of the Effects of Preanalytical Variables on Serum Peptidome Profiles Following Long-Term Sample Storage. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Satoh M, Umemura H, Sogawa K, Takiwaki M, Ishige T, Miyabayashi Y, Iwasawa Y, Kobayashi S, Beppu M, Nishimura M, Kodera Y, Matsushita K, Nomura F
  • 雑誌名: Proteomics Clin Appl 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1002/prca.201700047
  • 査読あり
• [雑誌論文] Variant in C-terminal region of intestinal alkaline phosphatase associated with benign familial hyperphosphatasaemia. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Itoga S, Utsuno E, Nishimura M, Yoshikawa M, Kato N, Matsushita K, Yokosuka O, Nomura F
  • 雑誌名: J Med Genet. 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1136/jmedgenet-2017-104964
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cutaneous Rosai-Dorfman disease associated with uveitis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Fukumoto T, Oka M, Masaki T, Sakaguchi M, Fukunaga A, Norose K, Sarayama Y, Imai H, Nishigori C.
  • 雑誌名: Eur J Dermatol. 巻: 27 ページ: 85-86
  • DOI: 10.1684/ejd.2016.2885
  • 査読あり
• [雑誌論文] Utility of the cytochrome c oxidase subunit I gene for the diagnosis of toxoplasmosis using PCR. (2017)
  • 著者名/発表者名: Feng X, Norose K, Li K, Hikosaka K.
  • 雑誌名: J Microbiol Methods. 巻: 141 ページ: 82-86
  • DOI: 10.1016/j.mimet.2017.08.001.
  • 査読あり
• [雑誌論文] FIR haplodeficiency promotes splicing to pyruvate kinase M2 in mice thymic lymphoma tissues revealed by six-plex tandem mass tag quantitative proteomic analysis. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kimura A, Kitamura K, Ailiken G, Satoh M, Minamoto T, Tanaka N, Nomura F, Matsushita K
  • 雑誌名: Oncotarget 巻: 8 ページ: 67955-67965
  • DOI: 10.18632/oncotarget.19061
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Improved sensitivity of serum/plasma 1α,25-dihydroxyvitamin D quantification by DAPTAD derivatization. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Satoh M, Ogawa S, Nishimura M, Matsushita K, Higashi T, Nomura F.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta 巻: 473 ページ: 173-179
  • DOI: 10.1016/j.cca.2017.08.033
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ubiquitination in Periodontal Disease: A Review (2017)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Satoh M, Takiwaki M, Nomura F
  • 雑誌名: Int J Mol Sci 巻: 18 ページ: E1476
  • DOI: 10.3390/ijms18071476
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Immune-complex level of cofilin-1 in sera is associated with cancer progression and poor prognosis in pancreatic cancer. (2017)
  • 著者名/発表者名: Satoh M, Takano S, Sogawa K, Noda K, Yoshitomi H, Ishibashi M, Mogushi K, Takizawa H, Otsuka M, Shimizu H, Miyazaki M, Nomura F
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 108 ページ: 795-803
  • DOI: 10.1111/cas.13181
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 自家末梢血幹細胞移植後に発症したトキソプラズマ症の検討－臨床所見およびST合剤予防投与の効果－ (2018)
  • 著者名/発表者名: 北原茉莉、廣島由紀、植松望武、數本弘子、宍戸努、貝梅紘子、桐原健彦、武田航、植木俊充、住昌彦、上野真由美、市川直明、彦坂健児、野呂瀬一美、小林光
  • 学会等名: 第40回 日本造血細胞移植学会総会
• [学会発表] 頚部リンパ節炎が長期間持続した急性トキソプラズマ症の一例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 松本佑慈、加勢田富士子、豊田一弘、村田昌之、野呂瀬一美、古庄憲浩
  • 学会等名: 第92回日本感染症学会総会
• [学会発表] 造血幹細胞移植後にトキソプラズマ脳炎を発症したMDS/AMLの一例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 山村綾子、井上明威、徳永賢治、松野直史、野呂瀬一美、松岡雅雄
  • 学会等名: 第40回造血細胞移植学会総会
• [学会発表] ディープシーケンスによるマラリア原虫のアトバコン耐性に関わる点変異の解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 彦坂健児、馮 雪、本間 一、松崎素道、元岡大佑、中村昇太、野呂瀬一美、北 潔
  • 学会等名: 第87回日本寄生虫学会大会
• [学会発表] Strongyloidiasis in Japan: Current status and perspectives (2018)
  • 著者名/発表者名: 生野 博、石川 敬、野呂瀬一美
  • 学会等名: 第87回日本寄生虫学会大会
• [学会発表] 眼トキソプラズマ症：マウスモデルにおける前房水中サイトカイン・ケモカイン解析―髄液および血清との比較 (2017)
  • 著者名/発表者名: 李 可きん、馮 雪、彦坂健児、野呂瀬一美
  • 学会等名: 第86回日本寄生虫学会大会
• [学会発表] シトクロムc酸化酵素サブユニット１遺伝子を標的としたPCRによる新規トキソプラズマ病診断法の検討 (2017)
  • 著者名/発表者名: 馮 雪、Kexin Li, 野呂瀬一美、彦坂健児
  • 学会等名: 第86回日本寄生虫学会大会
• [学会発表] 法医解剖前CTにおいて小腸内に条虫の存在が示唆された無鉤条虫症の1例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 星岡佑美、吉田真衣子、槇野陽介、彦坂健児、野呂瀬一美、岩瀬博太郎
  • 学会等名: 第28回日本臨床寄生虫学会大会
• [学会発表] 全身性エリテマトーデス(SLE)再燃時に播種性トキソプラズマ症の診断に至った一例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 古矢裕樹、鈴木一正、彦坂健児、古田俊介、池田啓、中島裕史、野呂瀬一美
  • 学会等名: 第28回日本臨床寄生虫学会大会
• [学会発表] Sulfamethoxazole-Trimethoprim(ST合剤)の脱感作により治療を継続できたトキソプラズマ脳炎(TE)の一例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 宮田順之、吉村幸浩、彦坂健児、野呂瀬一美、立川夏夫
  • 学会等名: 第31回日本AIDS学会学術集会
• [学会発表] 本邦における糞線虫症の現状と展望 (2017)
  • 著者名/発表者名: 生野 博、石川 敬、市村禎宏、野呂瀬一美
  • 学会等名: Conbio 2017 生命科学系学会合同年次大会