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2007 年度 実績報告書

感染性C型肝炎ウイルス粒子による肝細胞への遺伝子デリバリーシステムの構築

研究課題

研究課題/領域番号 18015051
研究機関国立感染症研究所

研究代表者

脇田 隆字  国立感染症研究所, ウイルス第二部, 部長 (40280789)

研究分担者 伊達 朋子  国立感染症研究所, ウイルス第二部, 研究員 (40392360)
森川 賢一  国立感染症研究所, ウイルス第二部, 協力研究員 (60384377)
相崎 英樹  国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (00333360)
村上 恭子  国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (30399456)
石井 孝司  国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (40280763)
キーワードHCV / ウイルス / 感染実験 / 遺伝子導入 / 肝細胞
研究概要

遺伝子治療をおこなうためには標的とする細胞に効率よく遺伝子を送り込む技術を開発する必要がある。このためにウイルスベクターを利用した遺伝子導入法が開発されてきた。また,ウイルス性,アルコール性,代謝性の進行性肝疾患に起因する非代償性肝硬変に対して有効な治療法は肝移植しかない。一方肝細胞癌のうち多発性進行肝癌に対する治療成績は依然として満足できる物ではなく,有効な治療法の開発が必要である。我々はC型肝炎ウイルスの研究において感染性cDNAクローンから培養細胞でのウイルス培養に成功した。この技術を基本にして,組み換え型C型肝炎ウイルス粒子を作成し,肝細胞に特異的に遺伝子をデリバリーする方法の開発を試みた。
感染性非増殖性ウイルスの作成:サブジェノミックレプリコン細胞に構造領域遺伝子を導入するとウイルス粒子が培養液中に分泌されることが明らかとなった。ウイルス粒子分泌にはコアからp7までの領域が必要だが,感染性ウイルス粒子の分泌にはNS2領域の発現が必須であるった。
感染性非増殖性ウイルスの解析:作製したウイルス粒子は感染性はあるが伝搬性は無く,フォーカスアッセイによい,感染フォーカスは単一または2個の感染細胞からなっていた。また,この感染はCD81およびウイルス表面蛋白に対する抗体で抑制することができることから,HCV特異的なレセプターを介して感染していると考えられた。
レポーター遺伝子の導入:感染性非増殖性ウイルスにパッケージングされるウイルスゲノムにはネオマイシン耐性遺伝子がコードされている。このウイルス粒子を細胞に感染させた後にG418の選択培養を行うと感染細胞はネオマイシン耐性遺伝子発現により生存した。この結果は感染性非増殖性ウイルスによる遺伝子導入が可能であることを示した。

  • 研究成果

    (21件)

すべて 2008 2007

すべて 雑誌論文 (8件) (うち査読あり 8件) 学会発表 (13件)

  • [雑誌論文] Trans-encapsidation of hepatitis C virus subgenomic replicon RNA with viral structure proteins2008

    • 著者名/発表者名
      lshii K, 他
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun (In press)

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Development of plaque assays for hepatitis C virus-JFH1 strain and isolation of mutants with enhanced cytopathogenicity and replication capacity2008

    • 著者名/発表者名
      Sekine-Osajima Y, 他
    • 雑誌名

      Virology 371

      ページ: 71-85

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Monitoring the antiviral effect of alpha interferon on individual cells2007

    • 著者名/発表者名
      Kim CS, 他
    • 雑誌名

      J Virol 81

      ページ: 8814-8820

    • 査読あり
  • [雑誌論文] The NS3 helicase and NS5B-to-3'X regions are important for effcient hepatitis C virus strain JFH-1 replication in Huh7 cells2007

    • 著者名/発表者名
      Murayama A, 他
    • 雑誌名

      J Virol 81

      ページ: 8030-8040

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Infection of human hepatocyte chimeric mouse with genetically engineered hepatitis C virus and its susceptibility to interferon2007

    • 著者名/発表者名
      Hirag N, 他
    • 雑誌名

      FEBS Lett 581

      ページ: 1983-1987

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Hepatitis C virus non-structural proteins responsible for suppression of the RlG-l/Cardif-induced interferon response2007

    • 著者名/発表者名
      Tasaka M, 他
    • 雑誌名

      J Gen Virol 88

      ページ: 3323-33

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Scavenger receptor class B type l is a key host factor for hepatitis C virus infection required for an entry step closely linked to CD812007

    • 著者名/発表者名
      Zeisel MB, 他
    • 雑誌名

      Hepatology 46

      ページ: 1722-1731

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Robust production of infectious viral particles in Huh-7 cells by introducing mutations in hepatitis C virus structural proteins2007

    • 著者名/発表者名
      Delgrange D, 他
    • 雑誌名

      J Gen Virol 88

      ページ: 2495-503

    • 査読あり
  • [学会発表] C型肝炎ウイルスに対するワクチン開発2007

    • 著者名/発表者名
      脇田 隆字
    • 学会等名
      第11回日本ワクチン学会学術集会
    • 発表場所
      パシフイコ横浜
    • 年月日
      20071208-09
  • [学会発表] Analysis of NS5A region important for hepatitis C virus particle production2007

    • 著者名/発表者名
      Masaki T, Wakita T
    • 学会等名
      The 58th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
    • 発表場所
      Boston, MA, USA
    • 年月日
      20071102-06
  • [学会発表] 遺伝子型2a/2b間でのキメラウイルスの作製および性状解析2007

    • 著者名/発表者名
      伊達 朋子, 他
    • 学会等名
      日本ウイルス学会第55回学術集会
    • 発表場所
      札幌コンベンションセンター
    • 年月日
      20071021-23
  • [学会発表] HCV JFH-1株の複製および感染性ウイルス粒子形成に重要な領域の解析2007

    • 著者名/発表者名
      村山 麻子, 他
    • 学会等名
      日本ウイルス学会第55回学術集会
    • 発表場所
      札幌コンベンションセンター
    • 年月日
      20071021-23
  • [学会発表] HCV JFH-1株のin vivoでの病原性の検討2007

    • 著者名/発表者名
      加藤 孝宣, 脇田 隆字
    • 学会等名
      日本ウイルス学会第55回学術集会
    • 発表場所
      札幌コンベンションセンター
    • 年月日
      20071021-23
  • [学会発表] 肝細胞株における感染性HCV粒子の作製と性状解析2007

    • 著者名/発表者名
      赤澤 大輔, 他
    • 学会等名
      日本ウイルス学会第55回学術集会
    • 発表場所
      札幌コンベンションセンター
    • 年月日
      20071021-23
  • [学会発表] The important regions for RNA replication and infectious viusparticle formation of JFH-12007

    • 著者名/発表者名
      Murayama A, 他
    • 学会等名
      14th Intemational Meeting on Hepatitis C and Related Viruses
    • 発表場所
      Glasgow, Scotland,UK
    • 年月日
      20070909-13
  • [学会発表] An adaptive mutation in E2 glycoproteiln allow an effrlcient production of HCV particles with epitope-tagged envelope2007

    • 著者名/発表者名
      Takahashi H, 他
    • 学会等名
      14th International Meeting on Hepatitis C and Related Viruses
    • 発表場所
      Glasgow, Scotland,UK
    • 年月日
      20070909-13
  • [学会発表] Characterization of infectious HCV particles produced from various liver-derived cell lines2007

    • 著者名/発表者名
      Akazawa D, 他
    • 学会等名
      14th Intemational Meeting on Hepatitis C and Related Viruses
    • 発表場所
      Glasgow, Scotland,UK
    • 年月日
      20070909-13
  • [学会発表] Critical roles of virion-associated cholesterol and sphingolipids in the viral infectivity2007

    • 著者名/発表者名
      T Wakita
    • 学会等名
      The 7th Awaji International Forum on lnfection and Immunity
    • 発表場所
      The Hyogo Prefecture Awaji Yumebutai International Conference Center
    • 年月日
      20070901-05
  • [学会発表] 脂質のC型肝炎ウイルス感染、粒子形成における役割2007

    • 著者名/発表者名
      相崎 英樹, 他
    • 学会等名
      第43回日本肝臓学会総会
    • 発表場所
      ホテルグランパシフィックメリディアン
    • 年月日
      20070530-0601
  • [学会発表] Infection and replication of hepatitis C virus2007

    • 著者名/発表者名
      脇田 隆字
    • 学会等名
      アジア太平洋消化器病週間Asian Pacific Diges tive Week 2007サテライトシンポジウム
    • 発表場所
      神戸商工会議所会館
    • 年月日
      2007-10-17
  • [学会発表] C型肝炎のウイルス培養系の開発とその応用2007

    • 著者名/発表者名
      脇田 隆字
    • 学会等名
      第43回肝形態科学研究会
    • 発表場所
      ホテルグランパシフィックメリディアン
    • 年月日
      2007-05-30

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公開日: 2010-02-04   更新日: 2016-04-21  

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