| 研究概要 |
本研究課題では、哺乳類(マウス)交連ニューロンの系に着目し、そのサブタイプの個性決定化プログラムを転写調節因子の発現レベルにおいてまず同定し、そのプログラムによって制御されていると考えられているサブタイプ特異的な軸索ガイダンスの分子機構の解明を目指している。特に、交連ニューロンの軸索と正中部フロアプレート細胞との特異的な細胞間相互作用に焦点をあて、その相互作用がどのようなシグナル伝達経路をたどり、最終的にサブタイプ固有の軸索投射の表現型発現に影響を与えるのかの糸口をつかむことを最終目的としている。
本年度は、交付申請書に記載した研究実施計画を念頭に以下の研究を集中的に押し進めた。すなわち、後脳および中脳における正中部フロアプレートを越えて伸長した後の交連ニューロン軸索のサブタイプに固有の伸長パターンを網羅的、かつ系統的に把握し、個々のサブタイプに特有の軸索投射の表現型を詳細に解析した。具体的には今回マウス胎仔において正中部フロアプレート通過後の軸索の挙動を脂溶性の蛍光色素トレーサーとして知られるDiIを用いて可視化し、軸索投射パターンを網羅的に把握した。また神経細胞の細胞体から軸索先端までの軸索投射パターンをより明確にするために、マウス胎仔へのエレクトロポレーション法によりEGFP, EYFP, DsRedの蛍光タンパク質(レポータータンパク質)を含む発現ベクターを中脳ならびに後脳の交連ニューロンに導入し、より詳細な軸索投射パターンの基礎データを得るに至った。またその時期にサブタイプ特異的な発現が推定される個性(運命)決定の役割をもつ可能性がある転写調節因子の時空間的な発現パターン、すなわち交連ニューロンの軸索の正中部フロアプレート交差前後での候補転写調節因子の発現パターンを個々の転写調節因子の抗体を用いたwhole-mount免疫組織化学染色法により解析した。
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