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EBウイルス(EBV)感染細胞におけるEBNA1蛋白質の局在の解析、および生化学的解析を目的として、hemagglutinin(HA)エピトープタグを付加したEBNA1蛋白質を発現する組換えEBVゲノムをBAC(bacterial artificial chromosome)システムにより作製した。これをもとにHAタグ付きEBNA1蛋白質を発現する組換えEBVを産生し、この組換えEBVのみがエピゾームとして感染する細胞を樹立した。
この細胞におけるEBVゲノムの局在、およびEBNA1蛋白質の局在を、それぞれFISH法および抗HA抗体を用いた蛍光免疫染色法により解析したところ、タグ付きEBNA1蛋白質は、核内においてEBVゲノムの存在部位に集積してドット状に局在していた。同調培養細胞を用いた実験において、タグ付きEBNA1蛋白質は細胞周期のG2期間期核内において頻繁にダブルドットとして観察され、さらにG2期未成熟凝縮染色体の姉妹染色体上に頻繁に対称性に局在することを見出した。FISH法と蛍光免疫染色法を同時施行して、EBNA1のダブルドットとEBVゲノムの相対的位置関係を調べたところ、EBVゲノムのシグナルがEBNA1のダブルドットにはさまれた形のダンベル様構造物が多数観察された。したがって、EBNA1蛋白質の姉妹染色体上への分配は、EBVゲノムの分配より先行することが明らかになった。
以上の結果より、EBNA1蛋白質は、細胞DNA複製の際に姉妹染色体上へ分配され、また分配されたEBNA1蛋白質に導かれる形で、複製したEBVゲノムの姉妹染色体上への均等分配が起きるというモデルが考えられた。
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